文献类型：期刊文章

作　　者：谷明娟[1] 高丽[1] 周新宇[1] 吴迪[1] 魏著英[1] 李光鹏[1] 白春玲[1]

GU Ming-Juan;GAO Li;ZHOU Xin-Yu;WU Di;WEI Zhu-Ying;LI Guang-Peng;BAI Chun-Ling(State Key Laboratory of Reproductive Regulation&Breeding of Grassland Livestock,Inner Mongolia University,Hohhot 010070,China)

机构地区：[1]内蒙古大学省部共建草原家畜生殖调控与繁育国家重点实验室

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2016ZX08007-002);内蒙古科技重大项目(KCBJ2018002)

年　　份：2020

卷　　号：28

期　　号：2

起止页码：242-250

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2019_2020、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：在养殖业中,牛角作为个体间争斗和伤人工具而成为养牛业的隐患之一。POLLED位点是目前发现控制牛(Bovidae)无角性状的主要位点,但在实际生产中,存在该位点的牛并不多见。为研制无角基因编辑牛,本研究利用CRISPR/Cas9技术,将POLLED位点P202ID基因型定点整合到有角蒙古牛(Bos taurus)胎儿成纤维细胞基因组中,建立P202ID基因型蒙古牛成纤维细胞系。首先以牛POLLED位点为靶点,设计合成4对单导向RNA (single guide RNA, sgRNA),并插入到CRISPR/Cas9系统表达载体。Surveyor酶切结果显示,由sgRNA1~4构建的载体切割效率依次是24%、26%、55%和17%,其中p Cas-Guide-EF1α-GFPsgRNA3活性最高。利用电转染法将活性最高的切割载体与含有P202ID序列的打靶载体共转染到蒙古牛胎儿成纤维细胞,通过流式细胞仪分选阳性单细胞,进一步培养使其形成单克隆细胞;然后利用PCR及DNA测序技术,鉴定得到4株定点整合入细胞基因组的阳性单克隆细胞,可作为后续体细胞核移植的供体细胞。本研究可为培育无角体细胞克隆牛提供实验材料和技术支撑,为研究牛角的发生发育机制提供基础材料。

关 键 词：蒙古牛 POLLED位点  无角牛  P202ID基因型  CRISPR/Cas9  

分 类 号：S823.94]