文献类型：期刊文章

作　　者：陈思秀 张馨方 刘玟妍 王天添 赵云冬 王艳双 高丽君 李明成 孙丽媛

CHEN Si-xiu;ZHANG Xin-fang;LIU Wen-yan;WANG Tian-tian;ZHAO Yun-dong;WANG Yanshuang;GAO Li-jun;LI Ming-cheng;SUN Li-yuan(School of Laboratory Medical,Beihua University,Jilin 132013,China;School of Medical,Beihua University,Jilin 132013,China;Innovation Center of DNA Fingerprint Detection Technology of Traditional Chinese Medicine,Jilin 132013,China)

机构地区：[1]北华大学医学技术学院 [2]北华大学医学院 [3]吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心

出　　处：《中国药学杂志》

基　　金：吉林省科技发展计划项目资助(20180201023YY,20190301014NY,20190303093SF,20170307001YY);吉林省科技创新中心建设项目资助(20190902018TC);北华大学研究生创新计划资助(北华研创合字[2018]038);国家级大学生创新创业训练项目资助(201811923006)

年　　份：2019

卷　　号：54

期　　号：22

起止页码：1840-1845

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、IPA、JST、PUBMED、RCCSE、RSC、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的从高温熬制的阿胶制品中提取微量动物源性DNA,建立并优化聚合酶链反应(PCR)方法快速鉴定阿胶中驴源性成分,建立分子生物学鉴定阿胶品质新方法。方法应用DNA纯化柱替代十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)方法中酚、氯仿等毒性较大的有机溶剂提取阿胶中驴源性基因组DNA,并对SDS-PK方法进行优化。结果提取驴源性基因组DNA最佳阿胶样本量为0.20 g,水浴消化1 h再进行DNA纯化柱处理可快速获得高质量阿胶基因组DNA,纯度均在1.70~1.80之间,可达到(187.8±0.56)ng·μL^-1。应用特异性引物进行PCR扩增、克隆、测序,与Gen Bank已登记的驴物种(MG931481.1)相似性为100%。结论本实验能在90 min内从深加工的阿胶及阿胶制品中提出动物源性基因组DNA片段,提取的DNA纯度和浓度能满足阿胶分子生物学鉴定的要求,建立的PCR方法可快速鉴定阿胶中驴源性成分;克隆得到驴特异性基因片段可作为鉴定阿胶真伪的标准化阳性对照,预期将广泛应用到阿胶及相关制品的质量监督工作中。

关 键 词：阿胶 DNA提取 DNA纯化柱  聚合酶链反应 驴源性  

分 类 号：R284[中药学类]