文献类型：期刊文章

作　　者：王文玲[1] 杨韧[1] 宋倩倩[2] 王慧娟[1] 邓瑶[1] 赵莉[1] 谭文杰[1,2]

Wang Wenling;Yang Ren;Song Qianqian;Wang Huijuan;Deng Yao;Zhao Li;Tan Wenjie(National Institute for Viral Disease Control and Prevention,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Key Laboratory of Biosafety,Ministry of Health of the People′s Republic of China,Beijing 102206,China;Zhejiang Provincial Key Laboratory of Medical Genetics,School of Laboratory Medicine and Life Sciences,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China)

机构地区：[1]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部生物安全重点实验室,北京102206 [2]温州医科大学检验医学院、生命科学学院,浙江省医学遗传学重点实验室,325035

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0500301,2016YFC1200900);国家传染病重大专项"十三五"计划(2016ZX10004001-003)。

年　　份：2019

卷　　号：39

期　　号：10

起止页码：763-770

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的比较中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)不同形式受体结合区(receptor binding domain,RBD)蛋白在抗体检测中的应用特点.方法以293T和ExpiCHO-STM系统表达并纯化制备MERS-CoV RBD,采用非变性凝胶电泳和Western blot对纯化RBD蛋白进行鉴定.然后以等量的上述RBD蛋白或昆虫细胞表达的RBD作为包被抗原,建立间接酶联免疫检测方法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA),用于MERS-CoV IgG抗体检测.同时以商品化的欧蒙MERS-CoV IgG抗体检测试剂盒(以S1为包被抗原)为对照,利用WHO提供的MERS-CoV抗体参比品对基于不同RBD蛋白抗原的ELISA方法进行应用效果比较分析.结果采用293T和ExpiCHO-STM系统成功制备MERS-CoV RBD单体/聚体抗原;不同来源与形式的RBD抗原均能特异识别MERS-CoV特异抗体,与正常成人血清无交叉反应;基于RBD所建立的ELISA应用于MERS-CoV抗体参比品检测,与欧蒙商品化试剂盒检测结果具有较好的一致性,但RBD-T4f、RBD-GCN4聚体RBD检测阳性标本的读值高且较集中,单体/二聚体RBD(昆虫细胞或哺乳动物细胞)阳性标本的读值低且较分散.结论建立了基于MERS-CoV不同单体与聚体RBD蛋白抗原的间接ELISA检测方法,可替代欧蒙商品化试剂盒用于临床检测MERS-CoV特异IgG抗体.RBD-T4f、RBD-GCN4包被抗原的应用结果优于RBD抗原.

关 键 词：中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)  受体结合区(RBD)  抗体  酶联免疫吸附试验(ELISA)  

分 类 号：R74]