文献类型：期刊文章

作　　者：孙伟伟[1,2] 钱晶[2] 王晶宇[2] 欧阳伟[2] 夏兴霞[2] 王晓丽[2] 诸玉梅[2] 马孙婷[2] 王永山[2] 徐业芬[1]

SUN Wei-wei;QIAN Jing;WANG Jing-yu;OUYANG Wei;XIA Xing-xia;WANG Xiao-li;ZHU Yu-mei;MA Sun-ting;WANG Yong-shan;XU Ye-fen(Department of Animal Science,Provincial Key Laboratory of Tibet Plateau Animal Epidemic Disease Research,Tibet Agricultural and Animal Husbandry College,Linzhi 860003,China;Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory for Veterinary Bio-Product Engineering and Technology,Ministry of Agriculture,Nanjing 210014,China)

机构地区：[1]西藏农牧学院动物科学学院,西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室,西藏林芝860003 [2]江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏南京210014

出　　处：《中国兽医科学》

基　　金：国家重点研发计划项目（2016YFD0500800）

年　　份：2019

卷　　号：49

期　　号：11

起止页码：1383-1389

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2019_2020、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为制备犬瘟热病毒(CDV)H蛋白单克隆抗体,采用蔗糖密度梯度离心法提纯CDV-Ondetstepoort株,利用RT-PCR方法扩增其H基因截短片段(H1、H2、H3),克隆至pET-28a(+)载体并转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化3种截短H蛋白;以纯化病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA、间接免疫荧光法(IFA)和病毒中和试验分析杂交瘤细胞的生物学特性。结果表明,纯化的截短H蛋白表达正确,以此筛选到7株能稳定分泌犬瘟热病毒和重组H2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3B1、3B5、3C5、3D5、5A6、4G12和7B2),抗体亚类鉴定均为IgG1κ;IFA检测均为阳性,表明7种单克隆抗体特异性好;病毒中和试验测定其培养上清的抗体中和效价为24~28,诱生BALB/c小鼠腹水的抗体中和效价为1×10^2~1×10^6;间接ELISA叠加试验显示,3B5、4G12、5A6、7B2之间的叠加系数均在50%以上,表明这4种单克隆抗体识别不同抗原表位;另外,3B5、4G12、5A6、7B2还能中和当前流行的Asia 1型CDV毒株,具有较好的广谱中和活性。本研究为后续CDV感染的免疫治疗和CDV检测方法的建立提供了材料基础。

关 键 词：犬瘟热病毒 H蛋白  单克隆抗体 抗病毒活性

分 类 号：S852.659.5]