文献类型：期刊文章

作　　者：陈进会[1] 陈珍容[2] 刘国庆[1] 陈洵[3] 段丽萍[3] 谢会[3] 石磊[3]

CHEN Jin-hui;CHEN Zhen-rong;LIU Guo-qing;CHEN Xun;DUAN Li-ping;XIE Hui;SHI Lei(Huangpu Customs Technicul Center,Dongguan 523072,China;Animal Husbandry Bureau Zhongjiang Sichuan Province,Deyang 618101,China;Institute of Food Safety and Nutrition Ji Nan University,Guangzhou 510025,China)

机构地区：[1]黄埔海关技术中心,广东东莞523072 [2]四川省中江县畜牧局,四川德阳618107 [3]暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州510025

出　　处：《中国兽医杂志》

基　　金：广东检验检疫局项目(2017GDK04)

年　　份：2019

卷　　号：55

期　　号：7

起止页码：26-29

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、RCCSE、核心刊

摘　　要：本试验根据虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)18S的保守序列设计4套环介导等温扩增(LAMP)引物,从中筛选出一套引物对LAMP反应体系(Bst DNA聚合酶浓度、内外引物浓度比、dNTP浓度、Mg2+浓度)和反应条件(温度)进行优化。并对优化后的LAMP反应体系和条件进行特异性、灵敏度及精密度验证。特异性试验表明,该方法能特异性检测虾肝肠胞虫,而与其他病害的核酸没有交叉反应;灵敏度试验表明,可检测浓度为10 fg/μL的质粒DNA,制作的标准曲线可对虾肝肠胞虫进行定量分析。重复性试验结果表明,该方法Ct值的变异系数为2.88%~3.02%,具有良好的稳定性。而对于人工侵染的虾肝肠胞虫样品,LAMP方法可检测低至0.44 pg/μL。应用建立的LAMP方法对3个不同地区的120份凡纳滨对虾样品进行检测,检测结果表明,EHP阳性样品数为43,与qPCR检测结果符合率达97%。本试验所建立的LAMP方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,并能在30 min内完成样品的检测,是快速、定量检测虾肝肠胞虫的有效手段。

关 键 词：虾肝肠胞虫  环介导等温扩增(LAMP)  18S  qPCR  

分 类 号：S852.723]