文献类型：期刊文章

作　　者：张飞飞[1] 孙文[1] 耿琦[1] 丁怡彤[1]

ZHANG Fei-Fei;SUN Wen;GENG Qi;DING Yi-Tong(College of Anesthesiology,Xuzhou Medical University,Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology,Xuzhou 221004,China)

机构地区：[1]徐州医科大学麻醉学院江苏省麻醉学重点实验室

出　　处：《生物技术通讯》

基　　金：江苏省高等学校自然科学研究(17KJD180006);徐州医科大学校级课题(2017KJ08)

年　　份：2019

卷　　号：30

期　　号：4

起止页码：523-527

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:建立一种有效、灵敏、准确的慢病毒滴度的分子检测方法。方法:分别构建慢病毒调控元件WPRE和单拷贝基因白蛋白(Alb)基因的重组质粒,紫外吸收法测量后经数学换算得到相应的拷贝数,以梯度稀释质粒为模板,利用基于SYBR Green的荧光定量PCR制作标准曲线,最后将待测样品的Ct值代入标准曲线,根据相应公式计算慢病毒滴度。结果:WPRE元件和Alb基因质粒的标准曲线回归方程分别为y=-4.255x+46.047、y=-2.8735x+35.831,相关系数R2均大于0.99,扩增效率E均大于95%,且熔解曲线波峰单一。计算获得不同稀释比例待测病毒的滴度为(4.3±0.9)×10^6 TU/mL。结论:基于SYBR Green的实时荧光定量PCR方法操作简便,能够准确测定慢病毒滴度。

关 键 词：慢病毒滴度  实时荧光定量PCR WPRE  白蛋白基因  

分 类 号：Q78]