文献类型：期刊文章

作　　者：付宇婷[1] 曹硕[1] 陈杨林[1] 吴宝江[1,2] 多曙光[3] 李喜和[1,2] 包斯琴[1]

FU Yu-ting;CAO Shuo;CHEN Yang-lin;WU Bao-jiang;DUO Shu-guang;LI Xi-he;BAO Siqin(Research Center for Animal Genetic Resources of Mongolia Plateau,College of Life Sciences,Inner Mongolia University,Hohhot 010070,China;Inner Mongolia Saikexing Institute of Breeding and Reproductive Biotechnology in Domestic Animal,Hohhot 011517,China;Laboratory Animal Center,Institute of Zoology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 1001019China)

机构地区：[1]内蒙古大学生命科学学院蒙古高原动物遗传资源研究中心,呼和浩特010070 [2]内蒙古赛科星家畜种业与繁育生物技术研究院有限公司,呼和浩特011517 [3]中国科学院动物研究所实验动物中心,北京100101

出　　处：《内蒙古大学学报（自然科学版）》

基　　金：国家自然科学基金项目(31560335)

年　　份：2019

卷　　号：50

期　　号：5

起止页码：501-512

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、CAS、JST、MR、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZMATH、ZR、核心刊

摘　　要：胚胎干细胞因其具有体外自我更新以及多向分化的能力,成为研究基因功能、细胞治疗和组织再生等的有力工具.胚胎干细胞的基因敲除模型在基因功能研究中起着重要作用.我们利用实验室现有的G3-AH和tWG3II-2两种胚胎干细胞系,通过脂质体转染嘌呤霉素(puromycin)标记的PX459-sgRNA载体,使用CRISPR-Cas9技术分别构建Bdh2、Dnmt3a和Dusp9敲除的胚胎干细胞系,通过基因型鉴定、PCR产物测序、qPCR和Western Blot等实验得到Bdh2、Dnmt3a和Dusp9纯合缺失的胚胎干细胞系.之后,qPCR、免疫荧光染色分别检测了Bdh2、Dnmt3a和Dusp9缺失的胚胎干细胞中多能基因、DNA甲基化相关基因和胚层分化相关基因表达变化.另外,通过嵌合体制备方法检测Dusp9基因敲除对胎儿卵黄囊(yolk sac)和胎盘(placenta)等发育的影响.实验结果表明,KO细胞系中分别敲除的基因(Bdh2、Dnmt3a和Dusp9)在mRNA水平和蛋白水平的表达均显著降低(p<0.05),且不同程度地影响了DNA甲基化相关基因和胚层分化相关基因的表达.Dusp9KO嵌合体结果显示,Dusp9KO均能贡献到胎儿及卵黄囊,但是,能否贡献到胎盘尚待进一步深入探究.本研究成功获得纯合敲除Bdh2、Dnmt3a和Dusp9基因的胚胎干细胞系,为研究Bdh2、Dnmt3a和Dusp9三种基因在胚胎干细胞中的作用提供了重要依据.

关 键 词：胚胎干细胞 CRISPR/Cas9  Bdh2  Dnmt3a  Dusp9  

分 类 号：Q95]