文献类型：期刊文章

作　　者：李昂[1] 郑瑾[1] 来宝长[1] 耿宜萍[1] 王艳[1] 王一理[1] 司履生[1]

机构地区：[1]西安交通大学生命科学与技术学院肿瘤研究所,陕西西安710061

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助No .3 0 0 70 848;国家高技术研究发展计划 (863 )资助No .2 0 0 1AA2 15 2 2 1

年　　份：2002

卷　　号：18

期　　号：6

起止页码：558-561

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的　构建HPV 18L1 E6、L1 E7嵌合基因的表达载体 ,并在CHO细胞中表达。方法　克隆HPV 18L1 E6和L1 E7基因 ,插入中介载体 pGEMT Easy中并测序鉴定。采用PCR定点突变法 ,突变L1 E6、L1 E7基因序列中与转化作用相关的位点 ,分别与L1基因连接后插入真核表达载体 pVAX1,构建真核表达质粒 pVAX1 L1E6Mxx、 L1E7Mxx。用磷酸钙沉淀法 ,转染CHO细胞 ,以抗HPV 18L1、抗E6和抗E7特异性单克隆抗体 (mAb)做ELISA和免疫细胞化学法检测。结果　ELISA检测显示 ,转染各种pVAX1 L1E6Mxx、 L1E7Mxx融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P N值均 >2 .1;免疫细胞化学检测 ,在胞浆、胞核可见棕黄色颗粒。结论　所构建的 pVAX1 L1E6Mxx E7Mxx融合蛋白表达质粒 ,可在转染细胞内表达相应的L1 E6Mxx和L1 E7Mxx蛋白 ,为今后进行DNA疫苗的研究奠定了基础。

关 键 词：L1-E6  L1-E7  人乳头瘤病毒18型 表达载体  定点突变

分 类 号：R373.9]