文献类型：期刊文章

作　　者：宋慧子[1] 栾兆进[1] 王兆琛[1] 杜炜[1] 赵勇超[1] 张家新[1]

SONG Huizi;LUAN Zhaojin;WANG Zhaochen;DU Wei;ZHAO Yongchao;ZHANG Jiaxin(Inner Mongolia Autonomous Region Key Laboratory of Animal Genetics, Breeding and Reproduction,College of Animal Science, Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot 010018,China)

机构地区：[1]内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室

出　　处：《畜牧兽医学报》

基　　金：内蒙古自治区自然科学基金(2018MS03012)

年　　份：2019

卷　　号：50

期　　号：9

起止页码：1624-1633

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系,为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞,利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞(SEECs),经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs,免疫荧光法鉴定其角蛋白18(CK18)和人端粒酶逆转录亚基(hTERT)表达情况;RT-PCR检测其hTERT mRNA的表达;采用CCK-8法绘制细胞生长曲线检测其增殖能力;利用流式细胞仪检测其周期和细胞凋亡情况;核型分析检测其倍体情况;从mRNA和蛋白水平检测其谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)和雄激素受体(AR)的表达情况。结果显示,原代绵羊附睾上皮细胞呈典型的铺路石状形态。hTERT成功转入绵羊附睾上皮细胞,传45代后,hTERT-SEECs仍呈铺路石状;hTERT-SEECs仍可稳定表达CK18和hTERT,并且拥有正常的二倍体核型;hTERT-SEECs增殖能力高于原代细胞,hTERT-SEECs处于G1期的细胞比例显著低于SEECs(P<0.05),处于S期细胞比例显著高于SEECs(P<0.05),且其活细胞率显著高于SEECs(P<0.05),凋亡率显著低于SEECs(P<0.05);hTERT-SEECs和SEECs的GPX5和AR蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。本研究所建立的hTERT-SEECs经长期培养后仍具有正常的附睾上皮细胞形态,增殖能力强并保留了附睾上皮细胞的生物学特性。

关 键 词：绵羊附睾上皮细胞  永生化 HTERT 基因表达  

分 类 号：S826.3]