文献类型：期刊文章

作　　者：胡艳红[1,2] 龚雪梅[1,2] 丁柳柳[1,2] 高嵩[1,2] 李婷婷[1,2]

HU Yan-hong;GONG Xue-mei;Ding Liu-liu;GAO Song;LI Ting-ting(Jiangsu Key Laboratory of Marine Pharmaceutical Compound Screening,Huaihai Institute of Technology,Lianyungang 222005,China;Co-Innovation Center of Jiangsu Marine Bio-industry Technology,Huaihai Institute of Technology,Lianyungang 222005,China)

机构地区：[1]淮海工学院江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室,连云港222005 [2]淮海工学院江苏省海洋生物产业技术协同创新中心,连云港222005

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室开放课题(HY201801)资助项目

年　　份：2019

卷　　号：39

期　　号：8

起止页码：59-65

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：酮还原酶CgKR2能够一步还原前手性羰基化合物生成高附加值的手性醇,有望解决手性醇传统制备方法的步骤烦琐和高成本问题,具有很高的经济效益。研究表明,CgKR2催化底物2-氧代-4-苯基丁酸乙酯(OPBE)生成普利类降压药的重要中间体(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯[(R)-HPBE]具有良好效果。但CgKR2的生产成本高昂、过程烦琐。利用短短芽孢杆菌胞外分泌表达酮还原酶CgKR2,获得该酶的高效表达,并经简便的一步镍亲和层析纯化,即获得高纯度酮还原酶CgKR2,产率高达每升发酵7. 8mg纯酶。以酶标板法测定其比活力、温度稳定性以及动力学参数等基本酶学性质,结果显示,CgKR2的比活力为(78. 32±7. 62) U/mg、Km为(0. 2±0. 02) mmol/L、Vmax为(117. 64±3. 6)μmol/(min·mg)、Kcat为73s^-1,与以往报道的数据一致,并且获得的CgKR2纯酶在30℃下孵育72h依然保持80%的活性,酶活的稳定性远好于以往的制备方法。开发出的一套简便高效的酮还原酶CgKR2表达纯化工艺,降低了生产成本、简化了生产工艺,可推进手性醇生物催化制备的普及,对其他生物催化工程酶的制备方法研究也有借鉴作用。

关 键 词：酮还原酶CgKR2  短短芽孢杆菌  分泌表达 生物催化

分 类 号：Q55]