文献类型：期刊文章

作　　者：朱和超[1] 梁婉[2] 范桂芳[1] 彭忠[1] 华琳[1] 汤细彪[3] 陈焕春[1] 吴斌[1]

ZHU He-chao;LIANG Wan;FAN Gui-fang;PENG Zhong;HUA Lin;TANG Xi-biao;CHEN Huan-chun;WU Bin(The Cooperative Innovation Center for Sustainable Pig Production,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China;Key Laboratory of Prevention and Control Agents for Animal Bacteriosis (Ministry of Agriculture). Instituted Animal Husbandry and Veterinary t Hubei Acaderny of Agricultural Science,Wuhan 430070,China;Wuhan Keqian Biology.,Ltd.,Wuhan 430070,China)

机构地区：[1]华中农业大学动物医学学院生猪健康养殖协同创新中心,湖北武汉430070 [2]湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室,湖北武汉430070 [3]武汉科前生物股份有限公司,湖北武汉430070

出　　处：《中国兽医学报》

基　　金：国家重点研发计划基金资助项目(2018YFD0500800)

年　　份：2019

卷　　号：39

期　　号：8

起止页码：1428-1434

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2019_2020、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了建立高效灵敏的伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白的间接免疫荧光抗体诊断方法,本研究将PRV/HN/SMX/2012毒株gE蛋白的自身信号肽及胞外域片段克隆到pFastBacHT B载体上,构建重组质粒pFastBacHTB-gE,并转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过3次蓝白斑筛选获得含有gE基因的重组杆粒rBacmid-gE。随后,将该杆粒转染至sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rAcMNPV-gE。经Western blot和间接免疫荧光实验(IFA)进行鉴定分析,发现重组gE蛋白在sf9细胞中表达。利用该sf9细胞建立检测血清中gE抗体的间接免疫荧光抗体(IDF)方法,通过反应条件的优化发现,将血清和羊抗猪FITC-IgG分别进行1∶40和1∶2 000稀释时所建立的方法能针对血清中gE抗体产生较强的特异性荧光;通过与商业化的ELISA检测gI/gE试剂盒(IDEXX)比较,所建立的检测方法与商业化试剂盒的总符合率为93.18%(164/176),阳性结果符合率93.75%(120/128),阴性结果符合率91.67%(44/48),2种方法存在很强的一致性(Kappa=0.832,CI=95%);-20℃条件下保存2个月的稳定性和重复性良好。

关 键 词：伪狂犬病病毒(PRV)  GE基因 杆状病毒Bac  to  Bac表达系统  间接免疫荧光抗体法(IDF)  

分 类 号：S852.65]