文献类型：期刊文章

作　　者：柳铭山[1] 周细根[1] 欧湘滢[1] 高宗泽[1] 李婷婷[1] 冯敏[1] 何康[1] 胡有生[1]

LIU Ming-shan;ZHOU Xi-gen;OU Xiang-ying;GAO Zong-ze;LI Ting-ting;FENG Min;HE Kang;HU You-sheng(School of Basic Medicine and Pharmacy,Medical College,Jinggangshan University,Ji'an,Jiangxi 343009,China)

机构地区：[1]井冈山大学医学部基础医学与药学院

出　　处：《井冈山大学学报（自然科学版）》

基　　金：国家自然科学基金项目(31560595);江西省教育厅科技计划项目(GJJ170630);井冈山大学第六批大学生创新创业训练计划项目(65)

年　　份：2019

卷　　号：40

期　　号：4

起止页码：23-28

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：为了重组斑马鱼(Daniorerio)双链RNA依赖的蛋白激酶(DrPKR)的双链RNA结合模体1(dsRBM1)和双链RNA结合模体3(dsRBM3)基因,并对重组基因表达的蛋白进行鉴定和功能分析,设计定向删除引物,应用PCR技术扩增DrPKR的ds RBM1和dsRBM3的基因片段,通过重叠PCR技术将dsRBM1和dsRBM3基因重组在一起得到dsRBM13基因,再将dsRBM13构建到原核表达质粒pET32a上并表达和纯化蛋白;通过表达蛋白的二聚化实验和pull down实验对重组蛋白dsRBM13进行体外功能分析。结果:DrPKR的ds RBM1和dsRBM3重组的蛋白dsRBM13可以进行二聚化和多聚化,且能结合Poly I:C(人工合成的dsRNA)。因此,重组DrPKR蛋白模体dsRBM13仍然具有二聚化和dsRNA结合活性,提示串联了三个dsRBM的Dr PKR激活过程中,串联两个dsRBM对DrPKR激活是必需的,并且在DrPKR结合dsRNA的激活过程中,因dsRNA的长短和空间结构的多样性,含有三个dsRBM的DrPKR可能存在更强和更多的结合方式,因此具有更强的抗病毒免疫反应功能。

关 键 词：DrPKR  dsRBM13  二聚化 POLY I:C  pull-down  重组  

分 类 号：Q784]