文献类型：期刊文章

作　　者：梁春梅[1] 许旭三[1] 余华军[2] 周霞[1] 温霞[1] 李友[1] KOJIC Snezana[3] 汪亚君[4] 马国达[1,5]

LIANG Chunmei;XU Xusan;YU Huajun;ZHOU Xia;WEN Xia;LI You;KOJIC Snezana;WANG Yajun;MA Guoda(Guangdong Key Laboratory of Age-Related Cardiac and Cerebral Diseases,Affiliated Hospital,Guangdong Medical University,Zhanjiang 524001,China;Experiment Animal Center,Guangdong Medical University,Zhanjiang 524023,China;Institute of Molecular Genetics and Genetic Engineering,University of Belgrade,Belgrade 11010,Serbia;Clinical Research Center,Affiliated Hospital,Guangdong Medical University,Zhanjiang 524001,China;College of Life Science & Technology,Heilongjiang Bayi Agricultural University,Daqing 163319,China)

机构地区：[1]广东医科大学附属医院广东省衰老相关心脑疾病重点实验室,广东湛江524001 [2]广东医科大学实验动物中心,广东湛江524023 [3]塞尔维亚贝尔格莱德大学分子遗传学及遗传工程研究所,塞尔维亚贝尔格莱德11010 [4]广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江524001 [5]黑龙江八一农垦大学生命科学与技术学院,黑龙江大庆163319

出　　处：《吉林大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金资助课题(81670252,81770034,81571157);黑龙江省教育厅基金资助课题(12521379);广东省科技厅自然科学基金资助课题(2015A030313523);中国-塞尔维亚科技合作委员会第3届例会项目资助课题(3-13);2016年度中共广东省委组织部与广东省人力资源与社会保障厅“扬帆计划”培养高层次人才项目资助课题(4YF17006G)

年　　份：2019

卷　　号：45

期　　号：4

起止页码：766-771

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2019_2020、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的:构建心脏阿霉素反应蛋白(CARP)基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步包装慢病毒,为研究CARP在阿霉素(ADR)心肌病中的作用及机制奠定基础。方法:将PCR扩增的大鼠CARP基因序列和设计合成的短发夹RNA(shRNA)序列分别插入GV-358和GV-248表达载体,行DNA测序鉴定。采用重组CARP过表达和shRNA表达穿梭载体与Helper 1.0和Helper 2.0辅助包装质粒共转染人胚肾细胞HEK293T,进行病毒包装和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。采用重组慢病毒感染HEK293T细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度。采用重组慢病毒感染H9C2细胞,分为对照组、Scramble RNA组、CARP过表达组和shRNA CARP组,Western blotting法检测各组细胞中CARP蛋白表达水平。结果:基因测序,CARP过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符。载体转染HEK293T细胞后,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。包装的CARP过表达及shRNA病毒感染H9C2细胞后,与对照组比较,CARP过表达组细胞中CARP蛋白表达水平升高5.3倍(P=0.01),shRNA CARP组细胞中CARP蛋白表达水平降低53%(P=0.02)。结论:成功构建了CARP过表达和特异性shRNA慢病毒表达载体并获得高感染效率的过表达和RNA干扰慢病毒,后者在H9C2细胞中能够干预CARP表达。

关 键 词：心脏阿霉素反应蛋白  RNA干扰 慢病毒 H9C2细胞

分 类 号：Q78]