文献类型：期刊文章

作　　者：王敏敏[1] 魏建宏[2] 任来峰[3]

WANG Min-min;WEI Jian-hong;REN Lai-feng(Department of Nursing,Fenyang College Shanxi Medical University,Fenyang 032200,China;Department of Anatomy,Department of Basic Medicine,Fenyang College Shanxi Medical University;Immune Department,Shanxi Cancer Hospital)

机构地区：[1]山西医科大学汾阳学院护理系,032200 [2]山西医科大学汾阳学院基础医学部解剖教研室 [3]山西省肿瘤医院免疫室

出　　处：《天津医药》

基　　金：山西省自然科学基金项目(2014021037-9);山西省大学生创新创业训练计划项目(2014052)

年　　份：2019

卷　　号：47

期　　号：7

起止页码：683-687

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(Core)真核表达载体,并研究其对人宫颈癌HeLa细胞自噬功能的影响。方法以HCV复制子质粒pJFH1为模板,PCR法扩增HCVCore基因片段,经纯化回收后与PLVX-IRESZsGreen1载体用同源重组法相连,构建PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,并经测序验证其序列的正确性。转染宫颈癌HeLa细胞,并设PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组、PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组以及未转染质粒空白对照组,通过免疫印迹法验证HCVCore蛋白在HeLa细胞中的表达,并用免疫荧光(IF)和免疫印迹检测自噬生物标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平。结果获得PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,测序结果表明构建的重组质粒序列完全正确,HCVCore重组蛋白可在HeLa细胞中有效表达;免疫荧光和免疫印迹结果表明,HCVCore过表达细胞LC3焦点和LC3Ⅱ蛋白表达水平明显增多,PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组的细胞LC3Ⅱ水平(1.069±0.049)高于PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组(0.776±0.047),差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,HCVCore蛋白过表达可诱导HeLa细胞自噬。

关 键 词：丙型肝炎  肝炎病毒属 病毒核心蛋白质类 自噬  重组质粒

分 类 号：R34[基础医学类] R373.21