文献类型：期刊文章

作　　者：刘芳[1,2] 卢婷[1,2] 蔡梦迪[1] 吴芳草[1,2] 陈相好[1,3] 王彩霞[1,2] 崔古贞[1,2] 陈峥宏[1,2]

LIU Fang;LU Ting;CAI Mengdi;WU Fangcao;CHEN Xianghao;WANG Caixia;CUI Guzhen;CHEN Zhenghong(Department of Microbiology,School of Basic Medical Sciences,Guizhou Medical University,Guiyang 550025,Guizhou,China;Key Laboratory of Medical Microbiology and Parasitology of Higher Learning of Guizhou,Guiyang 550025,Guizhou,China;College of Laboratory Medicine,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China)

机构地区：[1]贵州医科大学基础医学院微生物学教研室,贵州贵阳550025 [2]贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室,贵州贵阳550025 [3]贵州医科大学医学检验学院,贵州贵阳550004

出　　处：《贵州医科大学学报》

基　　金：贵州省研究生科研基金立项项目(11348);国家自然科学基金项目(31760318,31500078,31560318,31601012,81460314);贵州省科技计划项目[(2018)1132];大学生创新训练项目(DC201710660022)

年　　份：2019

卷　　号：44

期　　号：7

起止页码：757-761

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:获得高纯度Cas9蛋白,制备Cas9蛋白特异性抗体。方法:以Cas9基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得Cas9基因全长序列,利用无缝拼接技术构建pET28a-Cas9重组表达载体;转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达Cas9蛋白,并利用His-Tag技术分离纯化Cas9蛋白;将纯化获得的Cas9蛋白免疫新西兰大白兔,制备Cas9蛋白多克隆抗体。结果:pET28a-Cas9重组表达载体转化的E.coliBL21(DE3)可表达Cas9蛋白,纯化的Cas9蛋白免疫家兔得到的多克隆抗体效价>1∶256 K。结论:本研究获得了高质量Cas9蛋白及多克隆抗体,为后续CRISPR-Cas9基因编辑的应用奠定了良好的基础。

关 键 词：Cas9蛋白  蛋白表达与纯化  多克隆抗体

分 类 号：R737.33]