文献类型：期刊文章

作　　者：洪丹彤[1] 张帆[1] 王淑娥[1] 王红霞[1] 刘昆梅[3] 徐广贤[1,2] 霍正浩[1,4] 郭乐[1,2]

HONG Dan-tong;ZHANG Fan;WANG Shu-e;WANG Hong-xia;LIU Kun-mei;XU Guang-xian;HUO Zheng-hao;GUO Le(School of Clinical Medicine,Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China;Ningxia Key Laboratory of Clinical and Pathogenic Microbiology,General Hospital of Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China;Ningxia Key Laboratory of Cerebrocranial Diseases,Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China;Key Laboratory of Fertility Preservation and Maintenance of Ministry of Education,Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China)

机构地区：[1]宁夏医科大学临床医学院,银川7500212 [2]宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室,银川750021 [3]宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室,银川750021 [4]宁夏医科大学基础医学院宁夏生殖与遗传重点实验室,银川750021

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81760359、31600744);宁夏高等学校科学研究项目(NGY2017088)资助项目

年　　份：2019

卷　　号：39

期　　号：6

起止页码：1-8

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用,探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。方法:生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通过成功构建载体ATG7野生型(pMirGLO-ATG7-3'UTR-WT)和突变型,利用双萤光素酶报告系统、Western blot验证miR-17-5p和ATG7的靶向关系,同时构建结核分枝杆菌(H37Ra)感染的人源性THP-1巨噬细胞模型,将做不同处理的细胞分为三组:miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor、miR-17-5p nc。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测H37Ra感染对miR-17-5p表达量的影响,并且进一步通过Western blot、免疫荧光观察检测LC3蛋白的表达量和自噬小体的数量。结果: MTB感染能够引起miR-17-5p的下调,随着感染复数的增加有明显的降低。而生物信息学预测结果显示miR-17-5p与ATG7具有靶向性,双萤光素酶报告实验、Western blot验证miR-17-5p能够和ATG7靶向结合,并对其进行负调控。进一步通过Western blot、免疫荧光观察发现miR-17-5p mimics组LC3Ⅱ的表达下调,自噬小体表达降低,而miR-17-5p inhibitor组相反。其中对H37Ra感染组与未感染组之间比较,ATG7和LC3Ⅱ蛋白表达明显增强。结论: miR-17-5p直接靶向结合ATG7 3'UTR抑制自噬,在巨噬细胞抗MTB过程中发挥作用。

关 键 词：自噬 结核分支杆菌 miR-17-5p  ATG7  

分 类 号：Q819[生物工程类]