文献类型：期刊文章

作　　者：丁雪娇[1] 张安柳[1] 李昌哲[1] 赵华[1] 李军[1]

DING Xuejiao;ZHANG An-liu;LI Chang-zhe;ZHAO Hua;LI Jun(School of Public Health/The Key Laboratory of Environmental Pollution Monitoring and Disease Control,Ministry of Education,Guizhou Medical University,Guiyang,Guizhou 550025,China)

机构地区：[1]贵州医科大学公共卫生学院/环境污染与疾病监控教育部重点实验室

出　　处：《环境与职业医学》

基　　金：国家自然科学基金(81760574);贵州省科技厅基金(黔科合基础[2018]1134)

年　　份：2019

卷　　号：36

期　　号：5

起止页码：496-500

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、PROQUEST、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：[背景]砷可导致皮肤癌、肺癌等,相关机制存在多种假说。有研究认为DNA损伤及其修复抑制在砷的毒作用机制中起重要作用。本课题组前期在人群研究中也发现砷暴露可引起外周血淋巴细胞DNA双键断裂损伤。因此,探讨砷暴露引起细胞DNA损伤的分子机制对研究砷致癌机制尤为重要。[目的]通过检测人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(G9a)过表达前后NaAsO2所致细胞DNA损伤,初步探讨G9a与砷致HaCaT细胞DNA损伤修复关系。[方法]体外常规培养HaCaT细胞,以0.00、2.50、5.00、10.00μmol/LNaAsO2处理HaCaT细胞24h,其中0.00μmol/L为空白对照组。采用实时荧光定量PCR法检测G9amRNA转录水平,免疫印迹法检测G9a蛋白表达水平,单细胞凝胶电泳法检测各组HaCaT细胞DNA损伤水平。为了进一步验证G9a对NaAsO2致细胞DNA损伤的影响,用pCDNA3.1-G9a质粒瞬时转染HaCaT细胞的基础上,再以0.00μmol/L或10.00μmol/LNaAsO2处理细胞24h,另设立空白对照组、空载体转染组和单独染砷组(10.00μmol/L),采用上述实验方法检测各项指标的变化。[结果]用不同浓度NaAsO2染毒HaCaT细胞24h后,实时荧光定量PCR结果显示,与空白对照组(1.00±0.00)比较,2.50、5.00、10.00μmol/L染砷组G9amRNA转录水平(0.87±0.04、0.70±0.05、0.59±0.04)逐渐减低(P<0.05);免疫印迹法结果显示,G9a蛋白表达水平在5.00、10.00μmol/L染砷组(0.40±0.05、0.29±0.06)较对照组(0.59±0.09)降低;单细胞凝胶电泳结果显示,细胞彗星尾部DNA百分含量(0.63±0.07、3.26±0.34、6.79±0.66、13.18±2.34)和Olive尾矩(1.08±0.05、3.67±0.20、6.26±0.46、12.63±0.63)均随NaAsO2浓度增加而逐渐增加(r=0.93、0.95,P<0.05)。质粒转染HaCaT细胞后,实时荧光定量PCR和Westernblot结果显示,与对照组(1.00±0.00、0.67±0.06)比较,G9a高表达组G9amRNA的转录水平(105.93±28.72)及蛋白表达水平(1.07±0.06)均明显增加(P<0.05),与染砷组(0

关 键 词：砷 HACAT细胞 组蛋白赖氨酸甲基转移酶2  G9a  DNA损伤

分 类 号：R114]