文献类型：期刊文章

作　　者：张洋逸[1] 黄伟峰[1] 何楠[1] 李佳欢[1] 陈文锋[2] 黄少康[1]

ZHANG Yang-Yi;HUANG Wei-Fone;HE Nan;LI Jia-Huan;CHEN Wen-Feng;HUANG Shao-Kang(College of Bee Sciences, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China;Institute of Life Sciences, Fuzhou University, Fuzhou 350108, China)

机构地区：[1]福建农林大学蜂学学院,福州350002 [2]福州大学生命科学研究所,福州350108

出　　处：《昆虫学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(31772681);福建农林大学科研发展基金(KFA17245A);福建农林大学蜂学学院创新团队基金(13290001003)

年　　份：2019

卷　　号：62

期　　号：6

起止页码：703-709

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2019_2020、JST、PROQUEST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：【目的】以西方蜜蜂Apis mellifera工蜂肠道为例探究组织透明化技术--丙烯酰胺交联替换脂质透明硬化成像/免疫染色/原位杂交兼容组织水凝胶(clear lipid-exchanged acrylamide-hybridized rigid imaging/immunostaining/in situ hybridization-compatible tissue-hYdrogel, CLARITY)在昆虫组织上的应用,确定CLARITY与荧光原位杂交(FISH)相结合在昆虫肠道组织透明化中的适用性。【方法】依照CLARITY技术操作程序,用水凝胶固定西方蜜蜂肠道,并以被动方式透明化,再用靶向东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae 16S rRNA带异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记和靶向真核细胞18S rRNA带Texas RED标记的寡核苷酸荧光探针进行肠道组织的荧光原位杂交,然后用DAPI(蓝色)进行细胞核复染,通过激光共聚焦显微镜观察透明化的染色组织。【结果】首次成功将西方蜜蜂肠道组织透明化。在激光共聚焦显微镜下,观察到马氏管的原始分布形态,以及东方蜜蜂微孢子虫在中肠末端分布更密集的空间分布特征,并实现了对肠道组织的3D重构。【结论】CLARITY能应用于蜜蜂肠道组织透明化,透明化组织能进行原位杂交和激光共聚焦观察。CLARITY和FISH相结合免除抗体制备和石蜡切片的麻烦,直观展示肠道内部的真实状态,为昆虫生理病理研究提供了一种可靠特异的标记方法。

关 键 词：西方蜜蜂 东方蜜蜂微孢子虫  组织透明化技术  肠道 激光共聚焦显微镜 原位杂交

分 类 号：Q965.8]