文献类型：期刊文章

作　　者：朱先玉[1] 王历[1] 杨茂[1] 吴婷[1] 何涛[1] 杨文理[1]

ZHU Xianyu;WANG Li;YANG Mao;WU Ting;HE Tao;YANG Wenli(Institute for Cancer Medicine and School of Basic Medical Sciences, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China)

机构地区：[1]西南医科大学基础医学院肿瘤医学研究所

出　　处：《西南医科大学学报》

基　　金：四川省科技厅国际科技合作与交流计划项目(2014HH0010);泸州市-四川医科大学联合项目(2015LZCYD-S02(6/11));四川省教育厅重点项目(17ZA0449)

年　　份：2019

卷　　号：42

期　　号：3

起止页码：215-218

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的:构建hFGFR1α(human fibroblast growth factor receptor 1 alpha, hFGFRα)稳定细胞系,优化获得最适诱导表达条件,实现可诱导的、高效的稳定表达。方法:将hFGFR1α基因编码区全长克隆入pcDNA5/FRT/TO/2 × Flag表达载体,连同pOG44重组酶质粒共转染人宿主细胞Flp-InTM-T-RexTM-293细胞系(HEK293H),潮霉素B筛选获得阳性克隆细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ。用不同浓度强力霉素(doxycline, Dox)或者不同作用时间对HEK293H/hFGFR1ɑ细胞系进行诱导表达,Western Blot鉴定hFGFR1ɑ蛋白的表达情况。结果:构建了pcDNA5-FRT/TO/2 × Flag/hFGFR1ɑ重组表达载体,获得了可被Dox诱导表达的HEK293H/hFGFR1ɑ稳定细胞系;0.001μg/mL Dox即可诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,0.01μg/mL Dox即可诱导表达量达峰值;Dox对该细胞系作用2 h即诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,对其作用24 h后该细胞系的表达明显增强。结论:成功构建了可诱导的、高效的稳定表达细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ;Dox诱导该细胞系表达具有剂量差异性和时间依赖性。

关 键 词：FGFR1 稳定细胞系 蛋白质表达 Doxycline  诱导  

分 类 号：R786[口腔医学类]