文献类型：期刊文章

作　　者：邵颖[1] 王佳丹[1,2] 朱丹雁[1]

SHAO Ying;WANG Jiadan;ZHU Danyan(Institute of Pharmacology and Toxicology,College of Pharmaceutical Sciences,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China;Department of Pharmacy,Zhejiang Xiaoshan Geriatric Hospital,Hangzhou 310006,China)

机构地区：[1]浙江大学药学院药理毒理研究所,浙江杭州310058 [2]浙江萧山老年医院药学部,浙江杭州310006

出　　处：《浙江大学学报（医学版）》

基　　金：国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项(中印尼生物技术联合实验室)(2017YFE0102200);国家自然科学基金(81573426);浙江省公益性技术应用研究计划(2016C33157).

年　　份：2019

卷　　号：48

期　　号：1

起止页码：65-74

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:探索Rictor在小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞(ESC-CM)中的表达、定位及其对线粒体钙信号的调控作用。方法:通过经典“悬滴一悬浮一贴壁”三步法建立ESC-CM模型。利用免疫荧光法及蛋白质印迹法观察Rictor在ESC-CM中的定位。慢病毒技术干扰小鼠胚胎干细胞Rictor表达后,采用免疫荧光法考察ESC-CM内质网与线粒体的叠加情况;通过透射电镜观察ESC-CM的超微结构;活细胞工作站测定分化后心肌细胞线粒体钙瞬变;免疫共沉淀法检测ESC-CM中1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)、葡萄糖调节蛋白75(Grp75)、线粒体外膜的电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)间的相互作用;蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达情况。结果:Rictor在ESC-CM中主要定位于内质网及线粒体一内质网结构偶联(MAM)域,且其表达定位与线粒体及内质网有很好的叠加。干扰Rictor后,心肌细胞线粒体部分呈散点状,线粒体与内质网的叠加率降低(P<0.01);ESC-CM超微MAM形成减少;ATP刺激引起的ESC-CM线粒体钙瞬变幅度下降,其中钙瞬变斜率和上升峰值均降低(均P<0.01);MAM中IP3R、GTp75、VDAC1相互作用明显减弱,且Mfn2蛋白表达降低(P<0.01)。结论:干扰小鼠胚胎干细胞中Rictor表达可降低ESC-CM中钙从内质网到线粒体的释放,这可能是通过影响IP3R、Grp75、VDAC1间相互作用,减少Mfn2表达,进而破坏MAM来实现的。

关 键 词：胚胎干细胞/细胞学  肌细胞,心脏/细胞学  哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 钙信号 内质网  线粒体

分 类 号：R966]