文献类型：期刊文章

作　　者：王英泽[1] 曹晴晴[1] 马文惠[1] 王凤利[1] 薛巍[1] 王晨晨[1] 杜朝[1]

WANG Ying-Ze;CAO Qing-Qing;MA Wen-Hui;WANG Feng-Li;XUE Wei;WANG Chen-Chen;DU Chao(Department of Life Science, College of Biological Science and Engineering, Hebei University of Science and Technology, Shijiazhuang 050018, China)

机构地区：[1]河北科技大学生物科学与工程学院生命科学系,石家庄050018

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.81760750;31100715;81171455);河北省自然科学基金项目(No.C2013208005);河北省创新创业训练计划项目(No.201810082029);河北科技大学五大平台开放基金课题(No.2018PT18)资助~~

年　　份：2019

卷　　号：35

期　　号：4

起止页码：465-472

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、JST、PUBMED、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为提高对发生基因编辑细胞的筛选效率,本研究构建了具备正负筛选功能的供体质粒pN(CDS)(N2)-R,其正选择基因是无启动子NeoR,负选择基因是能自主表达的RED。利用该质粒和CRISPR-Cas9系统对小鼠B16细胞FasL进行编辑。G418筛选2周,获得混合克隆。镜下观察显示,混合克隆质量较高。junction PCR结果表明,有基因编辑发生。DNA测序结果表明,NeoR准确插入靶位点。细胞杀伤实验表明,FasL功能被有效敲除。该供体质粒的多克隆位点,充分利用同尾酶酶切位点,因而具有广泛的适用性。综上所述,在对各种位点进行编辑时,使用该供体质粒有助于混和克隆的筛选。

关 键 词：供体质粒  基因编辑  同源重组 FASL

分 类 号：Q78]