文献类型：期刊文章

作　　者：张梦璐[1] 樊晓娜[1] 邢智洋[1] 王月影[1] 王江[1] 褚贝贝[1] 韩立强[1] 杨国宇[1]

ZHANG Meng-Lu;FAN Xiao-Na;XING Zhi-Yang;WANG Yue-Ying;WANG Jiang;CHU Bei-Bei;HAN Li-Qiang;YANG Guo-Yu(College of Animal Science and Veterinary Medicine/Key Laboratory of Animal Biochemistry and Nutrition, Ministry of Agriculture, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China)

机构地区：[1]河南农业大学牧医工程学院/农业部动物生化与营养重点实验室,郑州450002

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家重点研发计划(No.2016YFD0500503和No.2017YFD0501100);中国博士后基金(No.2016M592291);河南省自然科学基金(No.62300410152);河南省兽医学优势特色学科建设工程(No.203/18xk0102)

年　　份：2019

卷　　号：27

期　　号：5

起止页码：856-863

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2019_2020、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1, BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关。为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A1慢病毒重组载体,用包装好的病毒感染奶牛乳腺上皮细胞,通过嘌呤霉素筛选获得超表达BTN1A1的乳腺上皮细胞株,提取细胞DNA,对超表达细胞株进行基因型鉴定,采用qRT-PCR和Western blot分析细胞株中BTN1A1基因和蛋白的表达;用尼罗红对细胞脂滴进行荧光标记,分析BTN1A1超表达对细胞脂滴的影响,构建BTN1A1-pEGFP-N1载体,观察BTN1A1蛋白与脂滴的共定位。结果显示,克隆的BTN1A1基因CDS区序列大约1 580 bp,成功构建重组的BTN1A1慢病毒载体,用5μg/mL嘌呤霉素筛选得到BTN1A1超表达细胞株,基因型鉴定表明细胞株基因组中成功插入BTN1A1基因;与对照组细胞相比,超表达细胞株的BTN1A1基因mRNA表达增加489倍(P<0.001),蛋白表达也明显增强;检测脂滴的荧光值发现,随着细胞培养时间的延长,BTN1A1超表达显著增加了细胞脂滴含量(P<0.01),共定位发现BTN1A1蛋白主要分布于细胞脂滴上。结果表明,超表达BTN1A1促进乳腺上皮细胞的脂滴合成。本研究为阐明奶牛乳腺上皮细胞的脂滴合成机制提供了基础数据。

关 键 词：嗜乳脂蛋白  乳腺上皮细胞 超表达,脂滴  

分 类 号：S852.2]