文献类型：期刊文章

作　　者：梁凯[1] 李艳文[1] 王贝贝[1] 傅晓茵[1] 刘晓泉[1] 何姗姗[1] 唐莉莉[1] 刘登宇[1] 石焕焕[1]

LIANG Kai;LI Yan-wen;WANG Bei-bei;FU Xiao-yin;LIU Xiao-quan;HE Shan-shan;TANG Li-li;LIU Deng-yu;SHI Huan-huan(Department of Parasitology,School of Preclinical Medicine,Guangxi Medical University,Nanning 530021,China)

机构地区：[1]广西医科大学基础医学院寄生虫学教研室,南宁530021

出　　处：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》

基　　金：广西医科大学2015年大学生创新创业训练计划项目(No.201510598041);广西壮族自治区教育厅2016年度中青年教师基础能力提升项目(No.KY2016YB086)~~

年　　份：2019

卷　　号：37

期　　号：2

起止页码：155-160

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的比较刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1 (rSAG1)与rSAG4单独及联合诱导昆明小鼠的免疫保护性作用,为研制复合型疫苗分子提供参考。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板, PCR扩增SAG1和SAG4,构建重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4;经双酶切和测序鉴定后,将序列正确的重组质粒转入BL21 (DE3)中,挑选阳性菌落,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体,超声裂菌。在变性条件下经镍离子亲合层析柱纯化目的蛋白,采用透析逐步降低尿素浓度的方法进行目的蛋白复性; 125只昆明小鼠按照随机数字表法分为5组,每组25只,分别为r SAG1免疫组、 rSAG4免疫组、 rSAG1+rSAG4联合免疫组、PBS对照组、 PBS+佐剂对照组,首次免疫为重组蛋白100μg/鼠,与等体积完全弗氏佐剂充分乳化后进行皮下多点注射,间隔2周加强免疫1次,连续2次,加强免疫时重组蛋白为50μg/鼠,与等体积弗氏不完全佐剂乳化,对照组小鼠注射等量PBS。各组小鼠于免疫前(0周)及首次免疫后第2、 4、 6周断尾取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG。在首次免疫后第6周,每只小鼠经腹腔注射3 000个弓形虫RH株速殖子进行攻击感染,观察小鼠生存时间,采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。结果弓形虫RH株SAG1和SAG4基因经PCR扩增后,目的片段大小分别为780和438 bp,与理论大小一致;重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4经双酶切和测序鉴定后,特异片段长度与SAG1和SAG4理论大小780和438 bp一致,测序结果显示,重组基因与目的基因序列完全一致; rSAG1、 rSAG4相对分子质量(Mr)为28 970、 17 720,与理论值一致,经纯化和复性后获得较纯的可溶性蛋白; rSAG1免疫组小鼠血清特异抗体IgG吸光度(A450值)为1.821±0.184,明显高于rSAG4免疫组(0.695±0.089)(P <0.05),但低于rSAG1+rSAG4联合免疫组(1.955±0.097)(P <0.05)。PBS组和PBS+佐剂组分别为0.019±0.002、 0.020�

关 键 词：刚地弓形虫 弓形虫重组蛋白表面抗原1  弓形虫重组蛋白表面抗原4  重组蛋白 联合免疫

分 类 号：R382.5]