文献类型：期刊文章

作　　者：邵继平[1] 符健[1]

SHAO Ji-Ping;FU Jian(Hainan Key Laboratory of Preclinical Pharmacology&Toxicology Research for Drugs,Hainan Medical University,Haikou 571199,China)

机构地区：[1]海南医学院海南省药物临床前药理毒理学研究重点实验室,海口571199

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：海南省科技厅社会发展项目(ZDYF2016126)

年　　份：2019

卷　　号：35

期　　号：5

起止页码：579-583

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:构建HIV-1ⅢB标准株、中国大陆地区主要流行株CRF-BC和海南省流行株CRF-AE野生型和突变型gp41表达载体,获得gp41重组蛋白。方法:利用基因定点突变的方法,将HIV-1ⅢB、CRF-BC和CRF-AE流行株野生型gp41基因中特定的N611Q糖基化位点天冬酰胺Asn突变为谷氨酰胺Gln,使该位点去糖基化。利用基因工程技术构建野生型pc DNA3. 1-gp41和突变型pc DNA3. 1-Mgp41表达载体。取测序正确的重组质粒转染293 T细胞,重组蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后采用免疫杂交方法进行分析。结果:测序结果显示野生型gp41的N611糖基化位点均由天冬酰胺(Asn)的编码基因(AAU)突变为谷氨酰胺(Gln)的编码基因(GAA),成功构建了野生型和突变型gp41表达载体。琼脂糖凝胶电泳分析显示野生型和突变型HIV-1 gp41基因大小约为700 bp,Western blot免疫杂交结果显示在26 k D处出现目的条带,与预期一致。结论:成功构建了HIV-1流行株去糖基化修饰gp41突变体,为研究去糖基化修饰gp41蛋白与疾病发生发展的分子机制奠定基础。

关 键 词：HIV-1 病毒  包膜糖蛋白gp41  去糖基化突变体  表达和纯化  

分 类 号：R373.32]