文献类型：期刊文章

作　　者：章泸尹[1] 郑义盈[1] 王成强[1] 安琪[1] 张萌萌[1] 黄海峰[1] 张振兴[1] 李宝宝[1] 朱姝[1] 杨小健[1] 曹瑞勇[1] 聂鑫[1] 杜丽[1] 王凤阳[1]

ZHANG Luyin;ZHENG Yiying;WANG Chengqiang;AN Qi;ZHANG Mengmeng;HUAGN Haifeng;ZHANG Zhenxing;LI Baobao;ZHU Shu;YANG Xiaojian;CAO Ruiyong;NIE Xin;DU Li;WANG Fengyang(Key Laboratory of Animal Genetic Engineering of Haikou City,Key Laboratory of Tropical Animal Reproduction&Breeding and Epidemic Disease Reseach of Hainan Province,College of Animal Science and Technology,Hainan University,Haikou 570228,China)

机构地区：[1]海南大学热带农林学院动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室,海口570228

出　　处：《中国畜牧兽医》

基　　金：国家肉羊产业技术体系(CARS-38);海南省重大科技计划项(ZDKJ2016017-01);中央引导地方科技发展专项资金项目(ZY2017HN07)

年　　份：2019

卷　　号：46

期　　号：3

起止页码：661-668

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列(登录号:CP003313.1)设计1对引物,通过PCR扩增获得目的基因片段,构建pET-28a(+)-recN重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,试验成功克隆了大小约为1 677 bp的recN基因序列,通过诱导表达的His-Tag融合蛋白大小约为66.94 ku,主要以包涵体形式存在。经生物信息学分析,recN蛋白的分子式为C_(2735)H_(4428)N_(786)O_(855)S_(16),消光系数为24 785,不稳定系数为43.99,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.62,为酸性蛋白;总平均亲水性为-0.316,与试验表达的包涵体蛋白性质相同,即同为疏水性蛋白;recN蛋白在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h,在酵母(体内)中的半衰期>20 h,在大肠杆菌(体内)中的半衰期>10 h;二级结构主要以α-螺旋(64.87%)及无规则卷曲(21.00%)为主;经疏水性分析,预测该蛋白有3个高疏水性区域和9个高亲水性区域。本试验结果为进一步探究多杀性巴氏杆菌recN基因的功能提供了参考依据。

关 键 词：多杀性巴氏杆菌 recN基因  克隆 原核表达 生物信息学分析

分 类 号：S852.612]