文献类型：期刊文章

作　　者：伍娜娜[1,2] 康超[1,2] 荣娜[1,2] 刘祥[1,2] 陈春琳[1,2] 陈琛[1,2] 丁锐[1,2] 吴三桥[1,2]

WU Nana;KANG Chao;RONG Na;LIU Xiang;CHEN Chunlin;CHEN Chen;DING Rui;WU Sanqiao(College of Biological Science and Engineering,Shaanxi University of Technology/Chinese-German Joint Institutefor Natural Product Research,Hanzhong 723001,China;Shaanxi Engineering ResearchCenter for Tall Gastrodia Tuber and Medical Dogwood,Hanzhong 723001,China)

机构地区：[1]陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所,陕西汉中723001 [2]陕西省天麻山茱萸工程技术研究中心,陕西汉中723001

出　　处：《河南农业科学》

基　　金：陕西理工大学人才项目(SLGQD1803);陕西省教育厅科学研究计划项目(17JK0137);国家外国专家局项目(GDT20186100426)

年　　份：2019

卷　　号：48

期　　号：3

起止页码：145-152

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究,通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株,利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件,采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白,免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体,Western blotting方法检测多克隆抗体的特异性,使用DNAMAN 8.0与MEGA 5.0软件对OmpF蛋白进行同源性和系统发生分析。结果显示,PCR扩增获得1 089 bp的ompF基因,成功构建pET-32a-ompF载体,其诱导表达产物分子质量为38 ku,与预期大小一致。正交试验获得OmpF菌株的最佳培养条件为葡萄糖浓度为0,转速为230 r/min,装液量为50 mL;最佳表达条件为诱导时菌液OD_(600)为0.5,IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为8 h,温度为28℃。SDS-PAGE切胶纯化获得高纯度的OmpF蛋白后,利用Western blotting证实OmpF蛋白抗血清具有较好的特异性。OmpF蛋白序列系统发生分析发现,OmpF蛋白在不同种类的细菌中具有较高的同源性,OmpF蛋白产生的抗体可能为不同种细菌的感染提供交叉免疫保护作用,并且不同种类细菌中OmpF蛋白可能具有相似的分子功能。

关 键 词：大肠杆菌  外膜蛋白OmpF  原核表达 正交试验 诱导条件  生物信息学分析

分 类 号：S852.4] Q816[动物医学类]