文献类型：期刊文章

作　　者：魏迎辉[1,2] 刘志国[1] 徐奎[1] Evanna Huyhn[3] Paul Dyce[3] 李继良[4] 周伟良[4] 董树仁[4] 冯保亮[4] 牟玉莲[1] Julang Li[2,3] 李奎[1]

WEI YingHui;LIU ZhiGuo;XU Kui;LI JiLiang;ZHOU WeiLiang;DONG ShuRen;FENG BaoLiang;MU YuLian;LI Kui(Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;Foshan University, Foshan 528000, Guangdong, China;Tianjin Ningheyuan Swinebreeding Farm, Tianjin 301504, China)

机构地区：[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,中国北京100193 [2]佛山科学技术学院,中国广东佛山528000 [3]Department of Animal BioSciences,University of Guelph,Canada Ontario N1G2W1 [4]天津市宁河原种猪场,中国天津301504

出　　处：《中国农业科学》

基　　金：转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08010-004);中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS05)。

年　　份：2018

卷　　号：51

期　　号：4

起止页码：770-777

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、FSTA、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：【目的】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种高致死性传染病,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。由于PRRSV遗传变异性较大,因此国内外并未有理想疫苗能够对此病进行有效防制。Cluster of differentiation 163(CD163)是PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的受体之一,研究旨在利用CRISPR/Cas9技术结合体细胞核移植技术制备CD163基因编辑的大白猪。【方法】针对猪CD163基因的第7外显子设计构建CRISPR/Cas9基因编辑载体;转染大白猪胎儿成纤维细胞,获得基因编辑阳性细胞克隆;以基因编辑细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎;胚胎移植到受体母猪生产CD163基因编辑猪,并进行后续的扩繁试验。【结果】设计的g RNA能够高效的识别靶位点。对获得的127个细胞单克隆进行PCR和测序显示,共有21个克隆发生突变,其中14个克隆为单等位基因突变或双等位基因杂合突变,7个克隆为双等位基因纯合突变。通过体细胞核移植技术,成功获得了CD163双等位基因编辑的纯合大白猪;并获得首批F1代CD163基因编辑仔猪,目前健康状态良好。随后将有更多的F1代CD163基因编辑猪陆续出生。【结论】制备的无抗性筛选标记的CD163双等位基因编辑猪,能够安全并快速地为培育抗PRRSV新品种猪提供育种材料。

关 键 词：CD163  CRISPR/Cas9  猪  猪繁殖与呼吸综合征

分 类 号：S858.28]