文献类型：期刊文章

作　　者：马跃宇[1] 费东亮[1] 郭亚茜[1] 金宏凯[1] 张溪研[1] 马鸣潇[1]

MA Yueyu;FEI Dongliang;GUO Yaxi;JIN Hongkai;ZHANG Xiyan;MA Mingxiao(Life Sciences Research Institute,Jinzhou Medical University,Jinzhou 121000,China)

机构地区：[1]锦州医科大学生命科学研究院,锦州121000

出　　处：《病毒学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(项目号:31772760);题目:中华蜜蜂囊状幼虫病毒编码siRNA及其RNAi抑制因子在免疫保护中作用;"辽宁特聘教授"项目~~

年　　份：2019

卷　　号：35

期　　号：1

起止页码：96-102

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：中蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease,CSBD)是造成中华蜜蜂患病死亡的主要原因之一,目前尚无有效的治疗方法。为了研究靶向中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)结构蛋白VP2基因的siRNA介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)作用和其对CSBV在中华蜜蜂幼虫体内复制的影响,设计合成针对CSBV VP2基因的特异性siRNA,以100 nM的浓度与pEGFPN1-VP2-CSBV融合表达载体共同转染至293T细胞中,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察和分析siRNA在体外对CSBV VP2基因表达的干扰效果。同时,将siRNA(1μg/μL)和1×10~7拷贝数的CSBV共同饲喂2日龄中华蜜蜂幼虫,检测幼虫体内CSBV拷贝数和幼虫存活率,研究siR-NA对中华蜜蜂幼虫体内CSBV复制的影响。荧光结果显示,在293T细胞中siRNA能抑制CSBV VP2蛋白的表达,并且通过流式细胞仪检测分析发现干扰效果接近40%。幼虫饲喂实验表明,饲喂siRNA组在各时间点幼虫体内CSBV拷贝数均低于CSBV对照组,且在摄入siRNA后感染CSBV的幼虫存活率明显上升,与CSBV组差异极显著(P<0.01)。通过本研究,证明了针对CSBV结构蛋白VP2基因的特异性siRNA能够介导产生RNAi,影响CSBV在中蜂体内的复制,为深入研究CSBV VP2基因的功能和研发抗CSBV生物制剂提供了理论基础。

关 键 词：中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)  结构蛋白基因VP2  RNA干扰  病毒复制

分 类 号：S855.3] S895.1[动物医学类]