文献类型：期刊文章

作　　者：王玲玲[1,2] 孙国鹏[2] 徐若楠[3] 何海汛[3] 闫占鹏[3] 王亚平[2] 邢瑞林[3] 任鹏举[3] 李鹏[2] 张艳芳[2] 朱艳平[2] 岳锋[2] 王选年[1,2]

WANG Lingling;SUN Guopeng;XU Ruonan;HE Haixun;YAN Zhanpeng;WANG Yaping;XING Ruilin;REN Pengju;LI Peng;ZHANG Yanfang;ZHU Yanping;YUE Feng;WANG Xuannian(College of Animal Science and Technology,Henan University of Science and Technology ,Luoyang 471000 ,China;Biotechnology Research Center ,College of Life Science and Technology,Xinxiang University,Xinxiang 453003 ,China;College of Life Science, Zhengzhou University,Zhengzhou 450000 ,China)

机构地区：[1]河南科技大学动物科技学院,洛阳471000 [2]新乡学院生命科学技术学院,生物技术研究中心,新乡453003 [3]郑州大学生命科学院,郑州450000

出　　处：《中国畜牧兽医》

基　　金：国家自然科学基金(31272539、3167131497).

年　　份：2018

卷　　号：45

期　　号：12

起止页码：3363-3370

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：试验旨在筛选并制备鸡PD-1单克隆抗体,对该单克隆抗体的免疫学特性、结合活性及其对鸡PD-1/PDL1信号通路激活的阻断作用进行初步研究。运用杂交瘤细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株,采用ELISA方法、Ig抗体亚型鉴定试剂盒、Western blotting鉴定抗体的免疫学特性,利用间接免疫荧光技术及流式细胞术检测筛选单抗与鸡PBMCs的结合情况,应用该单抗与IBDV感染7d后的鸡PBMC细胞作用,利用实时荧光定量PCR技术检测IL-2、IL-6和IFN-γ等细胞因子的表达情况。结果显示,试验获得1株特异、稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为PD-1-D05。该单克隆抗体的亚型属于IgG1,杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为1∶211和1∶2.048×105。ELISA和Western blotting检测结果表明,PD-1-D05单抗能与免疫原发生特异性反应,与pET-28a(+)、Rosetta菌株蛋白提取液上清及无关蛋白无交叉反应。间接免疫荧光及流式细胞术检测结果显示,PD-1-D05单克隆抗体能与鸡PBMC特异性结合,且IBDV感染7d后的PBMC经单抗处理后,IL-2表达量显著升高(P<0.05),IFN-γ转录水平显著下降(P<0.05),IL-6表达水平较IBDV攻毒组细胞虽有所下降,但并无统计学差异(P>0.05)。结果表明,试验成功筛选并制备了能够稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的细胞株,所获得的PD-1单克隆抗体具有良好的免疫学特性,该单抗能够特异性识别鸡PD-1分子并与鸡PBMC细胞特异结合,并在一定程度上恢复由于IBDV感染导致的PD-1/PD-L1信号通路激活引发的免疫调节相关细胞因子IL-2、IFN-γ的异常表达。

关 键 词：鸡  PD-1 单克隆抗体 生物学功能

分 类 号：S852.3]