文献类型：期刊文章

作　　者：王思思[1] 廖晓敏[1] 邵钟铭[1] 袁建玲[2] 封慕茵[1] 哈艳平[1] 李汝佳[1] 申志华[2] 揭伟[1]

WANG Si-si;LIAO Xiao-min;SHAO Zhong-ming;YUAN Jian-ling;FENG Mu-yin;HA Yan-ping;LI Ru-jia;SHEN Zhi-hua;JIE Wei(Department of Pathology, School of Basic Medicine Sciences, Guangdong Medical University, Zhanjiang 524023 , China;Department of Pathophysiology, School of Basic Medicine Sciences, Guangdong Medical University, Zhanjiang 524023 , China)

机构地区：[1]广东医科大学基础医学院病理学系广东湛江524023 [2]广东医科大学基础医学院病理生理教研室,广东湛江524023

出　　处：《中国病理生理杂志》

基　　金：广东省扬帆计划资助项目(No.4YF16007G).

年　　份：2018

卷　　号：34

期　　号：12

起止页码：2172-2179

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1。应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株。采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P <0. 01)。基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9。CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P <0. 05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P <0. 05); Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P <0. 05)。结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株。NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关; SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖。

关 键 词：鼻咽癌 SETD2基因  CRISPR/Cas9技术  基因组编辑  细胞增殖

分 类 号：R363.2] R739.6[基础医学类]