文献类型：期刊文章

作　　者：陶会竹[1] 肖宁[1] 赵雨婷[1] 房慧[1] 李槿年[1]

TAO Huizhu;XIAO Ning;ZHAO Yuting;FANG Hui;LI Jinnian(Anhui Province Key Laboratory of Veterinary Pathobiology and Disease Control,College of Animal Science and Technology,Anhui Agricultural University,Hefei 230036,China)

机构地区：[1]安徽农业大学动物科技学院,兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽合肥230036

出　　处：《水产学报》

基　　金：国家自然科学基金(31672698)

年　　份：2018

卷　　号：42

期　　号：10

起止页码：1606-1614

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为了建立草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,本研究在采用刮除法结合胶原酶IV消化法制备肠黏膜固有层单细胞悬液的基础上,使用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞,再经差异贴壁法纯化肠巨噬细胞,最后,用含10%胎牛血清和5%草鱼血清的RPMI 1640完全培养液,在28°C、5%CO2条件下原代培养肠巨噬细胞,并通过细胞形态学检查、分子标记检测和功能验证实验加以鉴定。结果显示,每尾鱼(约250 g)肠巨噬细胞的获得量约为3×107个,细胞活率为99.6%,纯度达到95%以上;倒置显微镜观察发现,原代培养4~5 d的贴壁细胞多呈圆形或多边形,体积明显增大,细胞汇合度达到95%;光镜和电镜观察到染色后的贴壁细胞具有巨噬细胞的形态结构特征,贴壁细胞经荧光定量PCR在m RNA水平检测到巨噬细胞特异性标志分子(草鱼巨噬细胞集落刺激因子受体),功能实验证实贴壁细胞具有吞噬功能,脂多糖能够显著提高其呼吸暴发活性。本研究首次成功建立了草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,为开展口服疫苗诱导的草鱼肠黏膜免疫应答研究提供细胞模型。

关 键 词：草鱼 肠巨噬细胞  分离  原代培养 鉴定  

分 类 号：S941.42]