文献类型：期刊文章

作　　者：林慕之[1] 刘兴德[2] 张璐[1] 刘姿麟[1] 刘志琴[1] 况春燕[1]

LIN Muzhi;LIU Xingde;ZHANG Lu;LIU Zilin;LIU Zhiqin;KUANG Chunyan(Department of Cardiology,Guizhou Medical University Affiliated People′s Hospital/Guizhou Provincial People′s Hospital,Guiyang,Guizhou 550002,China;Department of Cardiology,Guizhou Medical University Affiliated Hospital,Guiyang,Guizhou 550004,China)

机构地区：[1]贵州医科大学附属人民医院/贵州省人民医院心内科,贵阳550002 [2]贵州医科大学附属医院心内科,贵阳550004

出　　处：《重庆医学》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81360034;81560056);贵州省留学人员科技活动择优资助项目[黔人项目资助合同(2018)0003号]

年　　份：2018

卷　　号：47

期　　号：20

起止页码：2709-2713

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率。方法针对大鼠TRPC4序列设计4个RNA干扰靶点序列并合成双链DNA oligo,连接入干扰载体后转入大肠杆菌感受态细胞,培养后挑取转化子进行PCR鉴定及测序比对。利用Admax包装系统获得重组腺病毒Ad-shRNA-TRPC4小量扩增并测定病毒滴度,检测重组腺病毒对TRPC4表达的影响,最后将获得的重组腺病毒转染EPCs,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪测定其转染效率。结果 4组干扰质粒经培养后的转化子中均有阳性克隆,且阳性克隆与设计的干扰靶点序列一致;4组目的质粒均可抑制TRPC4蛋白的表达,合成的Ad-shRNA-TRPC4病毒滴度为5×1010 ifu/mL;倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测重组腺病毒在大鼠EPCs的转染效率分别为(85.47±2.05)%和(67.27±2.94)%。结论本实验成功构建Ad-shRNA-TRPC4载体,其在EPCs的转染效率高。

关 键 词：瞬时感受器电位C离子通道4  SHRNA 重组腺病毒载体 内皮祖细胞  

分 类 号：R363]