文献类型：期刊文章

作　　者：李云涛[1] 张齐[1] 汪立平[1,2] 黄宇良[1]

LI Yun-tao;ZHANG Qi;WANG Li-ping;HUANG Yu-liang(College of Food Science and Technology,Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing&Preservation/Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China;College of Food Science and Technology,Engineering Research Center of Food Thermal-processing Technology/Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China)

机构地区：[1]上海海洋大学食品学院,上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心,上海201306 [2]上海海洋大学食品学院,食品热加工工程技术研究中心,上海201306

出　　处：《山东农业大学学报（自然科学版）》

基　　金：上海市科学技术委员会工程中心建设(11DZ2280300)。

年　　份：2018

卷　　号：49

期　　号：4

起止页码：659-666

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CSCD、CSCD_E2017_2018、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：褐藻胶裂解酶是制备功能性寡糖的关键酶,以基因工程手段构建重组褐藻胶裂解酶,为实现褐藻胶裂解酶向商业酶转化奠定重要基础。以海洋弧菌SS-1总DNA为模板,运用PCR技术克隆得到褐藻胶裂解酶基因Alg,构建重组表达菌株E.coli BL21(DE5α)/p ET28a(+)-Alg,进行诱导表达,产物通过Ni-NTA resin亲和层析柱纯化,研究其酶学性质及酶解产物。结果表明,重组酶的最适pH为8.0,在pH 4.0~9.0范围内,30℃条件下保温2 h,仍能保持60%以上的相对酶活力;最适温度30℃,热稳定实验显示在高于30℃保温2 h其残余酶活力损失40%以上;在添加浓度1 mmol/L离子K^+、Na^+和Mg^(2+)显示对重组酶有明显的促进作用,Cu^(2+)、Fe^(3+)、Ba^(2+)、Fe^(2+)、Al^(3+)、SDS和EDTA等对该酶抑制作用明显;动力学参数Km为5.93 mg/mL,Vmax为826.44 mg/(mL·min);电离喷雾质谱(ESI-MS)分析其降解褐藻胶产物主要为小分子寡糖。重组酶是具有良好的酶学特性及有效的作用poly(M)降解产生低聚寡糖的双功能酶,可用于褐藻寡糖的制备。

关 键 词：褐藻胶裂解酶 海洋弧菌 克隆与表达  电离喷雾质谱  酶学性质

分 类 号：Q819[生物工程类]