文献类型：期刊文章

作　　者：张振兴[1] 聂鑫[1] 杨小健[1] 曹瑞勇[1] 李宝宝[1] 黄海峰[1] 朱姝[1] 李国华[1] 彭冬梅[1] 李亚颖[1] 王凤阳[1] 杜丽[1]

ZHANG Zhen xing;NIE Xin;YANG Xiao jian;CAO Rui yong;LI Bao bao;HUANG Hai feng;ZHU Shu;LI Guo hua;PENG Dong mei;LI Ya ying;WANG Feng yang;DU Li(Key Laboratory of Animal Genetic Engineering of Haikou City, Key Laboratory of Tropical Animal Reproduction & Breeding and Epidemic Disease Research of Hainan Province, College of Animal Science and Technology, College of Agriculture and Forestry, Hainan University, Haikou 570228, China)

机构地区：[1]海南大学热带农林学院动物科技学院,海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室,海口市动物基因工程重点实验室,海口570228

出　　处：《中国畜牧兽医》

基　　金：海南省重大科技计划项目(ZDKJ2016017-01)

年　　份：2017

卷　　号：44

期　　号：11

起止页码：3313-3319

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSS0180基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物,对类鼻疽伯克霍尔德菌hn-1株进行PCR扩增获得BPSS0180基因片段。将得到的BPSS0180基因连接到pET-28a(+)载体,构建pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后,将构建成功的pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。应用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale对BPSS0180基因序列进行生物信息学分析。结果显示,本试验成功克隆了1 146bp的BPSS0180基因,诱导表达得到的His-BPSS0180融合蛋白大小约为45ku,且主要以包涵体形式存在。BPSS0180蛋白的分子式为C_1779H_2809N_545O_536S_7,分子质量为40.6ku,消光系数为40 575,疏水指数为85.43。其不稳定系数为46.52,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.54,为酸性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)是-0.261,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构以α-螺旋(58.79%)和无规卷曲(32.02%)为主,预测其在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30h。本试验结果为进一步探究类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSS0180基因提供了一定的理论依据。

关 键 词：类鼻疽伯克霍尔德菌 BPSS0180基因  克隆 原核表达 生物信息学分析

分 类 号：R37]