文献类型：期刊文章

作　　者：陈晓梨[1] 陈鑫基[1] 郑静[1] 张昭秀[1] 胡建达[1]

机构地区：[1]福建医科大学附属协和医院,福建省血液病研究所,福州350001

出　　处：《福建医科大学学报》

基　　金：福建省医学创新课题资助项目 (2 0 0 1-CX-0 2 )

年　　份：2002

卷　　号：36

期　　号：3

起止页码：247-249

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的　建立银染 m RNA差异显示方法 ,为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础。　方法　采用随机引物和锚定引物各 1条 ,建立差异显示反转录聚合酶链式反应 (DDRT- PCR)和银染方法 ,对 DDRT- PCR过程中各实验影响因素进行优化 ,割取差异条带进行二次扩增。　结果　当总 RNA用量为 0 .2μg,引物浓度为 0 .6～ 1.0μm ol/ L ,d NTP浓度为 2 0 0μmol/ L ,Mg Cl2 浓度为 1.6～ 2 .0 mm ol/ L时 ,同时起始 5个循环的退火温度为 5 0℃ ,扩增效率最佳 ,特异性好 ,背景干净。　结论　 DDRT- PCR方法简便、快捷、灵敏、高效 ,可用于分离差异表达基因。

关 键 词：银染mRNA差异显示方法  基因扩增 差异表达基因 克隆 DDRT-PCR

分 类 号：R346[基础医学类]