文献类型：期刊文章

作　　者：王睿[1,2,3] 喻晓蔚[1,3] 徐岩[1,3]

WANG Rui;YU Xiao-Wei;XU Yan(Key Laboratory of Industrial Biotechnology,Ministry of Education,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu 214122,China;School of Pharmaceutical Science,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu 214122,China;Suqian Industrial Technology Research Institute of Jiangnan University,Suqian,Jiangsu 223814,China)

机构地区：[1]江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122 [2]江南大学药学院,江苏无锡214122 [3]宿迁市江南大学产业技术研究院,江苏宿迁223814

出　　处：《微生物学通报》

基　　金：国家自然科学基金(31671799);江苏省"六大人才高峰"人才项目(NY-010)~~

年　　份：2018

卷　　号：45

期　　号：11

起止页码：2311-2319

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【背景】华根霉脂肪酶的工业应用前景广泛,但是受到酶热稳定性较差的限制。【目的】对华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶r27RCL分子结构进行理性设计,以提高该酶热稳定性。【方法】以Disulfide by design软件筛选r27RCL分子表面能够形成二硫键的突变位点,共得到7对二硫键突变。利用全质粒PCR进行定点突变,并在毕赤酵母中表达获得突变酶。【结果】最佳突变酶m9/10 (S85C-Q145C)与野生型酶r27RCL相比,60°C下的半衰期分别提高了4.5倍,T_m值提高了4.2°C,而催化活性保持不变。蛋白质晶体结构模拟显示,位于β2折叠上的85C和位于α4螺旋上的145C可形成二硫键,从而提高酶的热稳定性。【结论】酶分子中引入新增二硫键可以显著提升酶的热稳定性。

关 键 词：华根霉脂肪酶  热稳定性 二硫键 理性设计  

分 类 号：Q814[生物工程类]