文献类型：期刊文章

作　　者：兰金芝[1] 刘扬[1] 徐澍[2] 张金娟[3] 王欢[4] 肖俊[5] 江银辉[6] 陈腾祥[1]

LAN Jinzhi;LIU Yang;XU Shu;ZHANG Jinjuan;WANG Huan;XIAO Jun;JIANG Yinhui;CHEN Tengxiang(Department of Physiology,School of Basic Medicine,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China;Department of Pathology,School of Clinical Medicine,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou China;Laboratory of Medical function,School of Basic Medicine,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China;Department of Human Histology and Embryology,School of Basic Medicine,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China;Department of Physics,School of Biology and Engineering,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China;Key Laboratory of Molecular Biology of Guizhou Province,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China)

机构地区：[1]贵州医科大学基础医学院生理学教研室,贵州贵阳550004 [2]贵州医科大学临床医学院病理学教研室,贵州贵阳550004 [3]贵州医科大学基础医学院机能学实验室,贵州贵阳550004 [4]贵州医科大学基础医学院人体组织与胚胎学教研室,贵州贵阳550004 [5]贵州医科大学生物与工程学院物理学教研室,贵州贵阳550004 [6]贵州医科大学贵州省分子生物学重点实验室,贵州贵阳550004

出　　处：《贵州医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(81060176);贵州省科技合作计划项目[黔科合LH字(2016)7348];贵阳市人民政府-贵州医科大学联合基金项目[筑科合同(20161001)002号]

年　　份：2018

卷　　号：43

期　　号：10

起止页码：1221-1226

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:设计人乳头状瘤病毒(HPV)基因芯片的质量控制点,优化质量控制探针和人β珠蛋白基因引物浓度以及HPV引物浓度比例,以提高基因芯片的检测质量。方法:收集临床HPV患者宫颈刮片样本,提取样本HPV58的DNA,用HPV通用引物扩增病毒DNA;利用人β珠蛋白引物扩增样本中的β珠蛋白DNA,将扩增的PCR产物与线性化的p MD18-T载体连接,构建人β珠蛋白和HPV58 L1区DNA质粒,转化大肠杆菌后,进行单克隆培养,获得HPV58样本和人β珠蛋白的DNA模板;以HPV58和人β珠蛋白DNA基因信息设计并制备扩增HPV和人β珠蛋白探针及PCR引物,将人β珠蛋白基因探针固定于基因芯片作为质量控制点(QC),按1∶20、1∶10、1∶5和1∶4比例混合单克隆HPV扩增引物与人β珠蛋白扩增引物,采用PCR反向点杂交技术,对模板进行扩增后,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物的产量,进行基因芯片孵育杂交和显色;用扫描仪扫描芯片,采用Image J软件对各阳性杂交信号点进行信号强度采集,计算最佳的人β珠蛋白扩增引物和HPV扩增引物浓度比值;将QC的探针点样浓度设为0. 1 pmol/L、1 pmol/L、10 pmol/L、50 pmol/L和100 pmol/L,检测信号强度,优化质量控制探针点样浓度。结果:扩增了HPV58病毒DNA和人β珠蛋白的DNA模板,设计了HPV58和人β珠蛋白探针及PCR引物;琼脂糖凝胶电泳检测分析发现,当人β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的浓度比例为1∶10时,二者同时PCR扩增时,扩增的强度较为一致,得到的产物量相当,用此引物浓度比例进行PCR获得的产物与测试芯片进行杂交,显色的平衡性较好;对QC的点样浓度进行测试发现,当QC点样探针浓度为50 pmol/L时,可以获得最佳的检测效果。结论:通过对β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的最佳浓度比例和质量控制探针最佳点样浓度的优化,提高了HPV检测点的检测质量。

关 键 词：人乳头状瘤病毒 基因芯片 引物 探针  Β珠蛋白 质量控制  

分 类 号：Q789] R373]