文献类型：期刊文章

作　　者：印双红[1] 张俊波[2] 张红[1] 石秀兰[1] 易继海[3] 张欢[3] 陈创夫[3] 李志强[4]

Yin Shuanghong;Zhang Junbo;Zhang Hong;Shi Xiulan;Yi Jihai;Zhang Huan;Chen Chuangfu;Li Zhiqiang(Department of Nursing,College of One Health,Tongren University of Guizhou,Tongren 554300,Chin;Department of Animal Microbiology,College of Agroforestry Engineering and Planning,Cultural and Technological Industry Innovation Research Center,Tongren University of Guizhou,Tongren 554300,Chin;Department of Preventive Veterinary Medicine,College of Animal Science and Technology,Shihezi University of Xinjiang,Shihezi 832002,China;Department of Microbiology,College of Biotechnology and Food,Shangqiu Normal University of Henan,Shangqiu 476000,China)

机构地区：[1]贵州省铜仁学院大健康学院护理学教研室,铜仁554300 [2]贵州省铜仁学院农林工程与规划学院动物微生物学教研室铜仁市文化科技产业创新研究中心,铜仁554300 [3]新疆石河子大学动物科技学院预防兽医学教研室,石河子832002 [4]河南省商丘师范学院生物与食品学院微生物学研究室,商丘476000

出　　处：《中华地方病学杂志》

基　　金：国家自然科学基金（31502067）;中国博士后科学基金（2017M613003）;铜仁学院博士科研启动基金（trxyDH1504）;贵州省教育厅自然科学研究重点项目[黔教合KY字（2015）411号];贵州省科技合作计划项目[黔科合LH字（2015）7238、7236号];贵州省教育厅青年科技人才成长项目[黔教合KY字（2017）312]

年　　份：2018

卷　　号：37

期　　号：9

起止页码：689-694

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2017_2018、EMBASE、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 观察布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspE的原核表达、免疫反应原性，以及重组蛋白BspE对细胞因子的影响。方法 根据GenBank中公布的羊种布鲁菌M5-90的BspE基因，合成基因片段，将其连接到PUC57载体测序，将测序正确的基因序列克隆到原核表达载体pET-28α上，转化入大肠埃希菌DE3感受态细胞中诱导表达，Ni-NTA亲和柱纯化目的蛋白，蛋白质免疫印迹（Western blot）法分析其反应原性。25 g／L BspE重组蛋白作用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，对照组采用相同含量的牛血清白蛋白（BSA）替代BspE，作用12、24、48 h，酶联免疫吸附试验检测白细胞介素（IL）-1β水平。结果 成功获得pET-28α-BspE重组表达质粒；Western blot结果显示，出现相对分子质量约为30.1 × 103的条带，纯化后条带单一，BspE重组蛋白具有较好的反应原性。与BSA组比较，BspE蛋白可显著提高IL-1β（ng／L）的水平（12 h：43.27 ± 2.13比30.24 ± 1.66、24 h：57.78 ± 3.44 比41.22 ± 1.22、48 h：72.52 ± 3.04比 46.77 ± 2.75，t = 8.38、7.86、10.89，P均 〈 0.05）。结论 BspE原核表达后具有较好的免疫反应原性，并可提高小鼠巨噬细胞IL-1β的表达水平，为效应蛋白在布鲁菌致病机制中作用的研究提供科学依据。

关 键 词：布鲁杆菌属  BspE基因  原核表达 炎症因子

分 类 号：R516.7]