文献类型：期刊文章

作　　者：周芳竹[1] 黄峥兰[1] 骆贞红[1] 王腾[1] 冯文莉[1]

ZHOU Fangzhu;HUANG Zhenglan;LUO Zhenhong;WANG Teng;FENG Wenli(Department of Hematology,Key Laboratory of Medical Diagnostics of Ministry of Education,College of Laboratory Medicine,Chongqing Medical University,Chongqing,400016,China)

机构地区：[1]重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016

出　　处：《第三军医大学学报》

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81572060); 重庆市研究生创新项目(CYS16136)

年　　份：2018

卷　　号：40

期　　号：17

起止页码：1548-1553

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的通过转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-BCR/ABL-ΔFABD于293T细胞中,探讨FABD结构域对Bcr/Abl癌蛋白抗凋亡能力的影响及相关机制。方法 293T细胞分别转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒,并设置Blank组和Adtrack组作为对照,分别培养24、48、72 h后,采用流式细胞术(FCM)检测转染荧光强度并筛选最佳转染条件,Western blot验证蛋白表达。采用WST-1(水溶性四唑盐)实验及FCM检测FABD结构域对BCR/ABL癌蛋白促增殖抗凋亡能力的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;Western blot分别检测p-bcr/abl、p-AKT、p-ERK表达及凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP蛋白活化情况。结果 FCM检测结果显示质粒转染效率呈时间依赖性增加,并选择48 h为最佳转染时间。Western blot结果证实已经成功构建野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒。WST-1实验及FCM检测结果显示,FABD结构域缺失可显著抑制细胞增殖并促进凋亡,在处理48 h后细胞凋亡数达到29.0%(P<0.05);在FABD结构域缺失后,p-AKT、p-ERK表达显著下调;凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP均在48 h明显活化。结论 FABD结构域缺失可显著削弱BCR/ABL癌蛋白促增殖抗凋亡能力,其可能与下调AKT、ERK信号通路并激活线粒体凋亡途径有关。

关 键 词：FABD结构域  BCR/ABL AKT、ERK信号通路  凋亡  

分 类 号：R394.3] R73-354[基础医学类]