文献类型：期刊文章

作　　者：李新洋[1,2] 杨霈瑶[1] 杨乃波[1,3]

LI Xinyang;YANG Peiyao;YANG Naibo(BGI-Shenzhen,Shenzhen 518083;BGI Education Center,University of Chinese Academy of Sciences,Shenzhen 518083,China;Complete Genomics,Inc.,San Jose,CA 95134,USA)

机构地区：[1]深圳华大生命科学研究院,广东深圳518083 [2]中国科学院大学华大教育中心,广东深圳518083 [3]Complete,Genomics,Inc.,San Jose,CA 95134,USA

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：中央引导地方科技发展专项资金(2016年度)

年　　份：2018

卷　　号：34

期　　号：4

起止页码：367-372

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的建立从单个B细胞扩增天然配对的B细胞受体(BCR)重链和轻链基因的方法。方法以用于亚洲人全基因组测序的"炎黄(YH)"细胞的永生化细胞系为材料,运用流式细胞术得到CD19+的单个B细胞,在单管里对单细胞进行裂解,获得总RNA,逆转录生成c DNA,两步巢式PCR扩增来源于同一个B细胞的天然配对的抗体重链和轻链,获得单个B细胞的全人源抗体的可变区序列信息。结果建立了稳定的单细胞BCR扩增方法,抗体基因扩增成功率高达80%以上。运用此方法,流式细胞术分选的单个B细胞在-80℃冻存2周以内仍能成功扩增;同一管里扩增产物经TA克隆和Sanger测序验证,既包含同一个B细胞的抗体重链基因,也包含其轻链基因,即含有天然抗体配对信息。自主设计和整理了一套行之有效的单细胞BCR引物。结论成功建立从单个B细胞扩增全人源抗体重链和轻链基因的方法。

关 键 词：单细胞 B淋巴细胞 抗体 重链和轻链配对  

分 类 号：R392.12] Q2-3[基础医学类]