文献类型：期刊文章

作　　者：封瑞[1] 吕丽婷[2] 苏敬阳[1] 康泽[1] 毛建伟[1] 郝丽英[1] 曾晓荣[3]

FENG Rui;LV Li-ting;SU Jing-yang;KANG Ze;MAO Jian-wei;HAO Li-ying;ZENG Xiao-rong(Department of Pharmaeeutieal Toxieology,School ofPharmaey,China Medieal University,Shenyang 110122;Department of Chemical Engineering,School of Mechanical Engineering and Automation,Northeastern University,Shenyang 110004;Key Laboratory of Medical Eleetrophysiology of Ministry of Education,Institute of Cardiovascular Research,Southwest Medical University Luzhou 646000,China)

机构地区：[1]中国医科大学药学院药物毒理学教研室,沈阳110122 [2]东北大学机械工程与自动化学院过程装备与环境工程研究所,沈阳110004 [3]西南医科大学心血管医学研究所医学电生理教育部重点实验室,泸州646000

出　　处：《解剖科学进展》

基　　金：国家自然科学基金(31400981;31471091)

年　　份：2018

卷　　号：24

期　　号：4

起止页码：408-410

语　　种：中文

收录情况：ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的探讨制备纯化重组蛋白的酶切方法,比较不同蛋白纯化方法的差异。方法在大肠杆菌BL-21中分别诱导表达p GEX-6p-3/CT1,p GEX-6p-3/CT3,p GEX-6p-3/Ca M,p GEX-6p-3/Ca MKⅡ。采用超声破碎、B-per试剂以及B-per试剂加变性复性试剂盒等方法制备带GST标签的融合蛋白,进一步在不同条件下使用蛋白酶进行酶切获得相应蛋白。将制备得到的蛋白进行SDS-PAGE电泳鉴定,同时,使用pull-down方法对蛋白活性进行鉴定。结果采用B-per试剂以及变性再复性试剂盒,同时酶切时加入DTT,能得到较高浓度与纯度的CT1蛋白。而无论采用B-per试剂或超声破碎,只要酶切时加入DTT均能获得CT3蛋白。采用简单的超声破碎,酶切时不需加入任何试剂即可得到高浓度与高纯度的胞浆蛋白Ca M,而目前仍没找到纯化Ca MKⅡ蛋白的理想方法,需进一步的实验研究。结论重组蛋白酶切纯化方法存在差异,DTT可能在酶切纯化蛋白时起到关键作用。

关 键 词：重组蛋白 钙通道 酶切 膜蛋白

分 类 号：Q814.9[生物工程类]