文献类型：期刊文章

作　　者：肖洁[1] 刘朱东[1] 彭胜男[1] 何昊城[1] 穰杰[1] 刘熊[1] 丁学知[1] 夏立秋[1]

XIAO Jie;LIU Zhudong;PENG Shengnan;HE Haocheng;RANG Jie;LIU Xiong;DING Xuezhi;XIA Liqiu(Key Laboratory of Microbial Molecular Biology/State Key Laboratory of Development Biology of Freshwater Fish/College of Life Science,Hunan Normal University,Changsha 410081,China)

机构地区：[1]湖南师范大学生命科学学院/微生物分子生物学湖南省重点实验室/省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,长沙410081

出　　处：《中国生物防治学报》

基　　金：国家"863"计划(2011AA10A203);国家"973"计划(2012CB722301);国家自然科学基金(31770106);湖南省协同创新中心项目(20134486);湖南省教育厅项目(10CY013)

年　　份：2018

卷　　号：34

期　　号：4

起止页码：625-638

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CSCD、CSCD2017_2018、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由Gln A基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用。本文研究了Gln A基因对刺糖多孢菌Saccharopolyspora spinosa的生长发育及次级代谢产物合成的影响,从刺糖多孢菌基因组中克隆了gln A基因的部分片段,将其与穿梭载体p OJ260连接,构建敲除载体p OJ260-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌野生菌中,获得刺糖多孢菌敲除菌株S.spinosa-△gln A;同时,利用重叠延伸PCR将gln A基因置于红霉素强启动子Perm E下,并将融合片段Perm E-gln A与穿梭载体p OJ260进行酶切酶连,构建过量表达载体p OJ260-Perm E-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌中,获得了刺糖多孢菌过量表达菌株S.spinosa-gln A。表型分析发现,gln A基因的敲除对刺糖多孢菌的菌丝形态、孢子萌发等方面都有显著的抑制作用。HPLC检测分析发现,过量表达菌株中多杀菌素产量相比原始菌株提高到170%;该研究表明gln A基因对刺糖多孢菌的生长发育与多杀菌素的合成有一定的影响,为研究其在链霉菌次级代谢过程中的作用奠定了重要基础。

关 键 词：刺糖多孢菌 多杀菌素 谷氨酰胺合成酶 阻断 过量表达  

分 类 号：S476]