文献类型：期刊文章

作　　者：胡晓霞[1,2,3] 于瑞嵩[1,3] 司伏生[1,3] 陈冰清[1,3] 董世娟[1,3] 宋增福[2] 李震[1,2,3]

HU Xiao-Xia;YU Rui-Song;SI Fu-Sheng;CHEN Bing-Qing;DONG Shi-Juan;SONG Zeng-Fu;LI Zhen(Institute of Animal Science and Veterinary Medicine,Shanghai Academy of Agricultural Sciences,Shanghai 201106,China;National Demonstration Center for Experimental Fisheries Science Education（Shanghai Ocean University）Shanghai 201306,China;Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding,Shanghai 201106,China)

机构地区：[1]上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106 [2]水产科学国家级实验教学示范中心(上海海洋大学),上海201306 [3]上海农业遗传育种重点实验室,上海201106

出　　处：《微生物学通报》

基　　金：国家自然科学基金(31572519;31402219);科技部国际合作专项(2013DFG32370);国家重点研发计划(2016YFD0500101);上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2015)第6-1-9号)~~

年　　份：2018

卷　　号：45

期　　号：7

起止页码：1508-1517

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【背景】猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪而引起的一种急性肠道传染病,常导致病猪水样腹泻、呕吐、脱水。自2010年起,其大规模的暴发给养猪业造成巨大的经济损失。由于对PEDV免疫机理及侵入机制知之甚少,至今仍缺乏有效的PED防治措施。【目的】研究orf3对PEDV体外增殖的影响。【方法】利用基于RNA同源重组的PEDV反向遗传学操作技术拯救一系列携带不同orf3基因及orf3基因缺失的重组PEDV;将获得的重组PEDV以MOI 0.1感染Vero细胞,分别于感染的第8、16、24、32、40、48 h测定其TCID_(50)并绘制病毒生长曲线;分别在感染25 h和36 h利用全自动细胞计数分析仪对6孔板内的细胞进行计数,并于感染后的第12、24、36、48 h用CCK-8试剂盒对其细胞活力进行测定。【结果】RT-PCR结果及细胞病变观察证明成功拯救到了携带不同orf3基因或orf3基因缺失的重组PEDV;进一步的免疫组化分析结果证实PEDV的ORF3蛋白可以在Vero细胞中合成。SPSS软件分析表明携带orf3基因的重组PEDV的滴度(TCID_(50))显著高于缺失orf3基因的重组PEDV的滴度;带有orf3基因的重组PEDV感染Vero细胞25 h和36 h时的活细胞数显著高于缺失orf3基因的重组病毒感染相同时间时的活细胞数;而且重组PEDV感染Vero细胞24 h后,带有orf3基因的重组PEDV的细胞活性显著高于缺失orf3基因的重组病毒。【结论】ORF3蛋白对于PEDV在Vero细胞中的增殖具有促进作用,该作用是通过延缓或减少感染细胞的死亡实现的。本研究为揭示PEDV orf3基因的功能和PEDV复制机制的研究提供理论基础。

关 键 词：ORF3 猪流行性腹泻病毒 体外增殖

分 类 号：S852.651]