文献类型：期刊文章

作　　者：李成[1] 张雨迪[1] 黄小波[1] 刘浩宇[1] 刘志鹏[1] 赵玉佳[1] 曹三杰[1] 文心田[1] 文翼平[1] 赵勤[1] 伍锐[1]

LI Cheng;ZHANG Yu-di;HUANG Xiao-bo;LIU Hao-yu;LIU Zhi-peng;ZHAO Yu-jia;CAO San-jie;WEN Xinotian;WEN Yi-ping;ZHAO Qin;WU Rui(Research Center of Swine Disease, College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China)

机构地区：[1]四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130

出　　处：《畜牧兽医学报》

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0500700)

年　　份：2018

卷　　号：49

期　　号：6

起止页码：1256-1264

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2017_2018、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：本研究旨在克隆猪丁型冠状病毒(PDCoV)S1基因(1—1 566bp),体外表达S1基因抗原表位预测区Sa(106—1 290bp)蛋白并制备抗该蛋白质的多克隆抗体。运用生物信息学软件分析S1核苷酸和编码氨基酸序列特征,将S1基因抗原表位预测区Sa克隆至原核表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b-Sa,转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达、超滤柱浓缩纯化重组蛋白、Ni柱亲和层析,Western blot检测Sa蛋白的活性,将Sa蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果表明,CHN-2015毒株S1基因开放型阅读框大小为1 566bp(GenBank No.KY398009),编码522个氨基酸,是具有亲水性的非跨膜蛋白,存在15个潜在的B细胞抗原表位;原核表达Sa重组蛋白,该蛋白质在37℃下用终浓度为0.8mmol·L^(-1)IPTG诱导5h后,蛋白质主要以可溶性形式存在,免疫印迹显示表达的Sa蛋白在上清与包涵体中都有良好的反应性;用纯化的Sa蛋白四次免疫家兔,获得的兔抗Sa蛋白抗体效价可达1∶10 240。本研究克隆了S1基因,原核表达了Sa蛋白和制备了高效价的兔抗Sa蛋白抗体,具有良好的免疫原性,为后续深入开展S蛋白的功能研究奠定了基础。

关 键 词：猪丁型冠状病毒  S1基因 克隆  原核表达 抗原性 多克隆抗体

分 类 号：S852.659.6]