文献类型：期刊文章

作　　者：张培星[1] 李涓[1] 窦倩倩[1] 贾晓晖[2]

ZHANG Pei-xing;Li Juan;DOU Qian-qian;JIA Xiao-hui(Department of Laboratory Diagnostics, Cangzhou Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine, Cangzhou 061001, Hebei Province, China)

机构地区：[1]河北省沧州中西医结合医院实验诊断科,河北沧州061001 [2]河北北方学院医学检验学院病原生物与免疫学研究所免疫学教研室,河北张家口075000

出　　处：《微生物学免疫学进展》

年　　份：2018

卷　　号：46

期　　号：2

起止页码：15-19

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。

关 键 词：甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2  表皮生长因子功能区  多克隆抗体 琼脂双扩散法  免疫印迹

分 类 号：R392.11]