文献类型：期刊文章

作　　者：温丽娟[1] 刘发伟[1] 林长光[2] 陈子韬[1] 张哲[1] 张豪[1] 李加琪[1] 袁晓龙[1]

WEN Li-juan;LIU Fa-wei;LIN Chang-guang;CHEN Zi-tao;ZHANG Zhe;ZHANG Hao;LI Jia-;YUAN Xiao-long(l. College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China;Fujian Guanghua BEST Eco-agriculture and Animal Husbandry Development Co. Ltd. Sanming 365106, China)

机构地区：[1]华南农业大学动物科学学院,广州510642 [2]福建光华百斯特生态农牧发展有限公司,三明365106

出　　处：《畜牧兽医学报》

基　　金：国家现代农业产业技术体系(CARS-35);福建省科技重大专项(2012NZ0003-3);国家科技基础性工作专项(2014FY120800633);华南农业大学大学生创新训练项目

年　　份：2018

卷　　号：49

期　　号：4

起止页码：667-674

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2017_2018、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：旨在研究母猪Nhlh2基因启动子活性及其与转录因子之间的调控关系,为探索该基因的表达调控提供分子水平的依据,也为研究母猪繁殖机制提供一定的参考。本研究以猪卵巢组织DNA为模板,PCR扩增Nhlh2不同长度的启动子缺失片段,克隆到pGL3-basic载体构建启动子报告基因重组质粒,并将其转染到猪卵巢颗粒细胞,测定相对双荧光素酶活性值;通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP),研究Nhlh2启动子与YY1、C/EBPβ蛋白之间的相互作用;随后构建转录因子超表达、突变载体和小干扰RNA(siRNA),利用双荧光素酶检测系统进行活性验证。经双荧光素酶报告系统检测发现,Nhlh2基因的P7(-238^+129)区域启动子转录活性最高,-654^-238片段范围可能存在负调控元件,-238^-20区域可能存在正调控元件;通过生物信息学分析和ChIP验证,Nhlh2启动子区-101^-85和-153^-140区域分别是转录因子YY1和C/EBPβ的结合位点;突变YY1和C/EBPβ的结合位点后,P7的双荧光活性显著上调;超表达YY1和C/EBPβ后,P7的双荧光活性显著下调;干扰YY1和C/EBPβ的表达后,P7的双荧光活性显著上调。本研究确定了猪Nhlh2基因的核心启动子区域为-238^+129,YY1和C/EBPβ分别结合在Nhlh2基因启动子区的-101^-85和-153^-140区域,抑制猪Nhlh2基因的转录活性。

关 键 词：猪  Nhlh2基因  启动子活性 转录调控元件

分 类 号：S828.2]