文献类型：期刊文章

作　　者：张利卫[1,2] 曹贝贝[1] 李炳晓[1,2] 张云飞[1,2] 韦学雷[1] 韩丽[1] 胡慧[1,2]

ZHANG Li-wei;CAO Bei-bei;LI Bing-xiao;ZHANG Yun-fei;WEI Xue-lei;HAN Li;HU Hui(College of Anita al Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China;Key Laboratory for Anita al-derived Food Safety of Henan Province, Zhengzhou 450002, China)

机构地区：[1]河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002 [2]河南省动物性食品安全重点实验室,河南郑州450002

出　　处：《中国兽医学报》

基　　金：国家重点研发计划基金资助项目(2016YFD0500102);河南省科技开放合作基金资助项目(152106000047)

年　　份：2018

卷　　号：38

期　　号：4

起止页码：618-624

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：猪Delta冠状病毒（porcine delta coronavirus，PDCoV）是一种新发现的仔猪腹泻类冠状病毒，感染仔猪主要表现出水样腹泻、呕吐和脱水等临床症状，和猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）临床症状极其类似，且I临床上混合感染病例较多，单靠临床症状和剖检变化很难辨别这2种疾病，因此建立同时检测且能区分PDCoV和PEDV的检测方法具有重要意义。参照GenBank登录的PDCoVM基因和PEDVORF3基因特异性序列设计引物，扩增相应的基因片段，克隆构建重组质粒pMD-18T—PDCovM与pMD-18T—PEDVORF8，测序验证后，分别以此重组质粒为标准品，建立了能同时检测PDCoV和PEDV的SYBRGreenI双重荧光RTPCR方法，并对其扩增体系和扩增条件等进行了优化，同时对所建立的双重荧光RT—PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行了检测。结果显示，该试验成功建立了能同时检测PDCov和PEDv的SYBRGreenI双重荧光RTPCR方法，最低能检测到PDCoV和PEDV分别是28．6拷贝/μL和99．6拷贝/μL的质粒浓度，显示出较好的敏感性；在同样扩增条件下该方法具有较好的重复性；特异性试验表明，该方法仅能检测出PEDV和PDCoV，而对猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪伪狂犬病毒（PRV）等均不产生特异性扩增曲线。将所建立的双重荧光RTPCR方法以及单重荧光定量RT—PCR方法分别对198份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV和PD—CoV检测，结果显示，PDCoV阳性样品41份，阳性率为20．7％；PEDV阳性样品59份，阳性率为29．8％；同时感染这2种病毒的样品17份，阳性率为8．6％。与单重荧光定量RT—PCR方法对PEDV和PDCoV的检出率一样，符合率100．0％。本研究成功建立了PDCoV和PEDV的双重荧光RT—PCR方法，能同时准确地检测PDCoV和PEDV，这为PDCoV和PEDV的临床鉴别诊断和流行病学�

关 键 词：猪Delta冠状病毒(PDCoV)  猪流行性腹泻病毒(PEDV)  双重荧光RT—PCR  SYBR Green  I  

分 类 号：S855.3] S852.65[动物医学类]