文献类型：期刊文章

作　　者：黄海峰[1] 张振兴[1] 杨小健[1] 曹瑞勇[1] 李宝宝[1] 聂鑫[1] 朱姝[1] 李国华[1] 彭冬梅[1] 李亚颖[1] 王凤阳[1] 杜丽[1]

机构地区：[1]海南大学热带农林学院动物科技学院,海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室,海口市动物基因工程重点实验室,海口570228

出　　处：《中国畜牧兽医》

基　　金：国家现代农业产业技术体系(CARS-38); 海南省重大科技计划项目(ZDKJ2016017-01)

年　　份：2018

卷　　号：45

期　　号：2

起止页码：302-309

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段,将其连接至pMD19-T载体,构建pMD19-T-groEL重组质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定正确后,构建重组质粒pET-28a(+)-groEL。将鉴定正确的pET-28a(+)-groEL质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定,利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现,试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达,表达的融合蛋白大小约为64 ku,GroEL蛋白的分子式为C4510H7381N1641O1840S521,原子总个数为15 893,消光系数为32 500,不稳定指数为40.31,亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、无规则卷曲(Cc)分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。

关 键 词：类鼻疽伯克霍尔德菌 groEL基因  克隆 原核表达 蛋白质鉴定 生物信息学分析

分 类 号：Q78]