文献类型：期刊文章

作　　者：韩乐[1] 张国敏[2] 杨花[1] 庞静[1] 万永杰[1] 姚晓磊[1] 王锋[1] 张艳丽[1]

机构地区：[1]南京农业大学动物科技学院/江苏省家畜胚胎工程实验室,江苏南京210095 [2]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095

出　　处：《南京农业大学学报》

基　　金：江苏省自然科学基金项目(BK20161444)

年　　份：2018

卷　　号：41

期　　号：1

起止页码：132-139

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：[目的]本试验旨在建立一个实时追踪山羊细胞自噬发生状况的工具,以探讨细胞自噬对睾丸支持细胞(SC)和生殖细胞的影响。[方法]通过PCR法扩增mCherry-EGFP-LC3基因序列1 884 bp,将其导入真核表达载体pEX-3中,得到重组质粒pmCherry-EGFP-LC3;将pmCherry-EGFP-LC3及对照质粒p EX-3分别转染体外分离培养的山羊SC,饥饿处理12 h后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达,用RT-qPCR和Western blot检测细胞中自噬相关基因和蛋白表达变化,用透射电镜观察细胞自噬体的形成。[结果]成功构建了双荧光自噬报告载体,该载体能在山羊SC中表达,荧光显微镜下可见绿色荧光和红色荧光表达;饥饿处理后,该载体可以指示细胞中自噬泡的形成过程,且细胞自噬相关标记Beclin1 mRNA以及LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA比值和蛋白水平均显著上调,并能观察到初始自噬体的形成。[结论]获得的山羊SC可以作为后续试验的细胞模型;构建的双荧光pmCherry-EGFP-LC3自噬报告载体可为进一步研究山羊SC的自噬发生提供有效的工具。

关 键 词：自噬 睾丸支持细胞 微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3)  山羊

分 类 号：Q812[生物工程类]