文献类型：期刊文章

作　　者：楚熹橦[1] 秦晓东[2] 鲁承[1] 孙福亮[1]

机构地区：[1]延边大学农学院,延吉133000 [2]敦化市动物检疫站,敦化133700

出　　处：《中国畜牧兽医》

基　　金：延边大学青年基金项目(602016032)

年　　份：2018

卷　　号：45

期　　号：1

起止页码：71-76

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：试验旨在构建EfaA基因的原核表达质粒,并对其进行表达。根据GenBank中粪肠球菌EfaA基因序列(登录号:U03756)设计合成1对引物,利用PCR法扩增、克隆EfaA基因,并进行生物信息学分析,将EfaA基因亚克隆于pGEX-4T-1原核表达载体,构建pGEX-4T-EfaA原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,筛选最佳诱导时间并分析其表达蛋白的生物学特征。结果发现,试验成功获得大小为873bp的粪肠球菌EfaA基因。经IPTG诱导后,获得分子质量约为59ku的EfaA重组蛋白,以37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6h表达量最大。经Western blotting分析发现,具有较好的反应原性。本试验成功构建原核表达质粒pGEX-4T-EfaA,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达。

关 键 词：黑熊 粪肠球菌 心内膜炎抗原  原核表达

分 类 号：S852.611]